Amplisens hcv fl

Sümptomid

Võtmetel on aktiivsed võtmed, parkid ja aiad. Tom perebuvayuchi looduses, varto poturbuvatsya umbes vslnu bepeke, abi.

01.03.2017

AmniSure'i test

Samuti võite osta testist amnionivedeliku lekke määramiseks rasedatel Amnyshurist Kiievi apteekides:
1. Apteek "Arnica".

08.26.2016

FLOROKENOOS

Uue põlvkonna ulatuslik test, et diagnoosida kõiki kliiniliselt olulisi uro-genitaaltrakti nakkusi reproduktiivse vanuse naistel..

JUHISED "AmpliSense HCV-genotüüp-FL" AmpliSense

Ärakiri

1 INSTRUEERIMINE komplekti kasutamiseks reaktiive avastamis- ja diferentseerumist genotüüpide hepatiit C (HCV) kliinilistes proovides polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) hübridisatsiooni-fluorestsentsavastamine "reaalajas" režiim "AmpliSens HCV genotüübiga-FL» AmpliSens Föderaaleelarve institutsiooni Teaduse Kesk Epidemioloogia Instituut, Venemaa Föderatsioon, Moskva, Novogireevskaya tänav, 3a

2 SISUKORD LÜHENDITE LOETELU. 3 EESMÄRK. 3 MEETODI PÕHIMÕTE. 3 REAKTIIVITOETUSE VORMID JA VORMID. 5 ANALÜÜTILISED OMADUSED. 5 JUHISED. 6 TÄIENDAVAD MATERJALID JA SEADMED. 7 UURINGU MATERJALIDE ÜHENDAMINE, TRANSPORT JA HOIDMINE. 9 FRT-vormingus sisalduv kompositsioon, mis teostab PCRi teadusuuringute RNA väljavõtteid uuringute proovidest, mis juhivad tagasipöörduva reageerimise A. Valmistage torud pöördtranskriptsioonide jaoks. Amplifikatsioonitorude ettevalmistamine, kasutades PCR komplekti reagendi komplekti FRT-G A2 varianti. PCR-komplekti reaktiivikomplekti (valik FRT-G) abil amplifitseerimiseks kasutatavate torude ettevalmistamine. Detektsioonisüsteemidega amplifikatsiooni viimine reaalajas režiimis. KEHTIVUSE, TRANSPORDI JA HOIDMISE ÜHTLUSTAMISE TULEMUSTE ANALÜÜS JA TÕLGENDAMINE RIBO-sorb "2. LIIDE. RNA EKSTRAHEERIMINE, KASUTAMIST" RIBO-PREP "REIBENDI KOODI KASUTATUD TOOTE PRINTI KASUTATUD SÜMBOLID x (RG, IQ, MX, DT, SC) / VER / lk 2, 32

3 LÜHENDID järgmisi lühendeid ja sümboleid kasutatakse neid juhiseid DNA dezoksirubonukleinovaya happe cDNA komplementaarne DNA RNA Ribonukleiinhape alates pöördtranskriptiooni EKO sisekontrolli proovi OKO negatiivse kontrollina PKO positiivse kontrollina K + - positiivne kontroll PCR K - negatiivne kontroll PCR OK - negatiivne ekstraktsioonireguleerimine PCR polümeraasi ahelreaktsioon FBUN Keskinstituut epidemioloogia Rospotrebnadzor HCV FRT PAIGUTAMINE föderaalne eelarveasutus AmpliSense HCV Genotype-FL reagendi komplekt on mõeldud viiruse genotüüpide tuvastamiseks ja eristamiseks, mille eesmärk on tuvastada ja diferentseerida viiruse genotüüpe. hepatiit C (HCV) kliinilises materjalis polümeraasi ahelreaktsiooni meetodil (PCR) hübridisatsiooni-fluorestsentsi tuvastamisega "reaalajas" režiimis. HCV genotüüpide 1a, 1b, 2, 3a, 4 määramine viiakse läbi "PCR komplekti" variandi FRT-g1-4 abil; HCVa 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5a, 6 genotüübid määratakse, kasutades "PCR komplekti" varianti FRT-g1-6. See Reagendikomplekt on soovitav kasutada pärast avastamis- HCV RNA proovides kasutades kits mõeldud nii kvalitatiivset ja kvantitatiivset määramist HCV RNA (nt "AmpliSens HCV-FL», kasutades gibridizatsionnofluorestsentnuyu avastamise või "AmpliSens HCV EPh ", kasutades amplifikatsiooniproduktide elektroforeesi tuvastamist (toodetud FBUN TsNII Epidemioloogia Rospotrebnadzor)). TÄHELEPANU! PCR-uuringute tulemusi võetakse arvesse haiguse tervikliku diagnoosimise korral. 1. MEETODI PÕHIMÕTE 1 Kooskõlas Euroopa Liidu direktiiviga 98/79 / EÜ. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lehekülg 3 32-st

4 Testimispõhimõte põhineb RNA ekstraheerimisel vereplasmast koos rekombinantse sisemise kontrollprooviga (ASD), mis teostab reaalajas hübridiseerimis-fluorestsentsdetektori abil RNA pöördtranskriptsioonireaktsiooni ja cdna PCR amplifikatsiooni. Valenegatiivsete tulemuste välistamiseks viidi uuringusse VKO, mis võimaldab kontrollida analüüsi kõiki etappe ja hinnata PCR inhibiitorite mõju uuringu tulemustele. Ühe proovi HCV genotüübi määramine viiakse läbi mitmes katseklaasis, igas katseklaasis on diferentseeritud kaks HCV genotüüpi või üks HCV ja VKO genotüüp. Komplekt on mõeldud instrumentideks, millel on kaks või enam fluorestsentsi avastamise kanalit. Tabelis on näidatud kanalid, mille abil HCV genotüübid tuvastatakse iga reaktsioonisegu jaoks. Reaktsioonisegu 1b / 3a 1a / 2 BKO / 4 5a / 6 2 kanali tuvastatavad HCV genotüübid FAM / roheline 1b 1a CTP 5a JOE / HEX / kollane / Cy3a 3 FRT-g1-6 versioon kuulub PCR komplekti. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 4 32-st

5 REAKTIIVI KOMPLEKTIDE VORMID JA VORMID Reagendi komplekt on saadaval 1 formaadis: FRT-vorming Reaktiivikomplekt on saadaval 7 konfiguratsioonikomplektides: vormil 1 on RIBO-sorbi reagendi komplekti variant 50, REVERTA-L variant 50, PCR komplekt FRT-g1-4 variant. Vorm 2 sisaldab "RIBO-prep" reagendi komplekti varianti 50, "REVERT-L" võimalust 50, "PCR kit" võimalust FRT-g1-4. Vorm 3 sisaldab reaktiivikomplekti võimalust "PCR komplekt" FRT-g1-4. Vorm 4 sisaldab "RIBO-sorb" reagendi komplekti, variant 50, "REVERT-L", variant 50, "PCR kit", võimalus FRT-g1-6. Vorm 5 sisaldab "RIBO-prep" reagendi komplekti varianti 50, "REVERT-L" võimalust 50, "PCR kit" võimalust FRT-g1-6. Vorm 6 sisaldab "PCR komplekti" reagendi komplekti võimalust FRT-g1-6. Vorm 7 sisaldab mitmesuguseid reagentide komplekti, mis on pakendatud eraldi reagentidesse koos reagentide märgistamisega pakendamata pakendis. Täiendusvormid 1, 2, 3 on kavandatud hepatiit C viiruse genotüüpide 1a, 1b, 2, 3a, 4 kindlaksmääramiseks. Lõppvormid 4, 5, 6 on ette nähtud hepatiidi viiruse genotüüpide 1a, 1b, 2, 3a, 4, 5a, 6 kindlaksmääramiseks. C. Täitmisvormid 1, 2, 4, 5 on mõeldud täielikeks PCR-uuringuteks, kaasa arvatud RNA ekstraheerimine kliinilisest materjalist, RNA pöördtranskriptsioon ja cdna PCR-amplifikatsioon hübriid-fluorestsentsdetektoriga reaalajas. Komplektide 3 ja 6 vormid on ette nähtud cdna PCR amplifikatsiooni teostamiseks hübridisatsiooni-fluorestsentsi tuvastamisega reaalajas režiimis. Teostada täielik analüüs on vaja kasutada reagendikomplekte FBUN Production Research Institute of Epidemiology RNA ekstraheerimiseks (reagendikomplekte "ribo-aedpihlakas" või "ribo-prep") ja pöördtranskriptsioonivõime reaktsioon (kit reaktiiv "Reverte-L»). Komplekti 7 vorm on ette nähtud tootmiseks, et järgnev märgistus oleks kliendi keeles ja täielik komplekt. TÄHELEPANU! Blankettide 7 kasutamine toimub ainult vastavalt Rospotrebnadzori epidemioloogia keskasutuse FBUN heakskiidetud määrustele. ANALÜÜTILISED KARAKTERISTIKUD 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lehekülg 5 32

6 Analüütiline tundlikkus Ekstraheerimismaht, μl RNA / DNA ekstraktsioonikomplekt 100 "RIBO-sorb" 100 "RIBO-prep" Amplifikatsiooni ja detekteerimise komplekt "PCR komplekt" versioon FRT-g1-4, "PCR kit" valik FRT- g1-6 "PCR kit" versioon FRT-g1-4, "PCR kit" versioon FRT-g1-6 Analüütiline tundlikkus, RÜ / ml 2,5 x 10 3 5x10 3 Analüütiline spetsiifilisus Reagendi komplekti analüütilise spetsiifilisuse hindamisel ei ilmnenud ristreaktsioone hepatiit C viiruse genotüübid 1a, 1b, 2a, 3a, 4, 5a ja 6, kasutades kõrge kontsentratsiooniga rekombinante kovariantseid positiivse kontrolli proovide ja vereplasma vastavate valimite genotüübiga. Ettevaatusabinõud töö tuleb läbi viia laboratoorium molekulyarnobiologicheskie (PCR) uuritakse kliinilistes proovides esinemise haigustekitajate suhtes, järgides sanitaar-epidemioloogiline eeskirjad SP "Security tööd mikroorganismidega III IV patogeensuse rühmad (ohtlikud) ja aktivaatorite parasiithaiguste", SanPiN "sanitaar- -epidemioloogilised nõuded meditsiinijäätmete käitlemiseks "ja suunised MU" Laborite korraldamine, kasutades amplifikatsioonimeetodeid n kleinovyh hapetega töötamisel sisaldav materjal mikroorganismide patogeensuse rühmad I IV ". Töötamisel järgige alati järgmisi nõudeid: - katsetatud proove tuleks lugeda nakkavaks, korraldada töö ja ladustamine vastavalt ühisettevõttele "III IV patogeensuse (ohu) ja parasitaarhaiguste patogeenide töö mikroorganismide ohutus". - Puhastage ja desinfitseerige leostatud proovid või reagendid, kasutades desinfektsioonivahendeid vastavalt ühisettevõttele "III IV patogeensuse (ohu) ja parasitaarhaiguste patogeenide töö mikroorganismide tööohutus". - Laboriprotsess peab olema ühesuunaline. Analüüs viiakse läbi 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 6 32

7 eraldi tuba (tsoonid). Töö peaks alustama valiku tsoonis, jätkake võimenduse ja tuvastamise tsoonis. Ärge tagastage proovid, seadmed ja reaktiivid sellele protsessi eelmise etapi alale. - Eemaldage kasutamata reagendid vastavalt SanPiN-ile "Sanitaar-epidemioloogilised nõuded meditsiinijäätmete käitlemiseks." TÄHELEPANU! Jäätmete eemaldamisel pärast amplifikatsiooni (PCR-tooteid sisaldavad katseklaasid) on vastuvõetamatu avada torud ja puista see sisu, kuna see võib viia laboratoorse piirkonna, seadmete ja reaktiivide saastumiseni PCR-toodete abil. Kasutage komplekti täpselt selle ettenähtud otstarbel vastavalt käesolevale juhendile. Luba ainult komplektis töötamiseks spetsiaalselt väljaõppinud töötajad. Ärge kasutage komplekti pärast aegumiskuupäeva. Kasutage ühekordselt kasutatavaid kindaid, laborikatteid, kaitsege silmi proovide ja reaktiivide töötamisel. Pese käed hoolikalt pärast tööpäeva. Vältige kokkupuudet naha, silmade ja limaskestadega. Võtta koheselt loputage kahjustatud piirkond veega ja pöörduda arsti poole. Soovi korral on saadaval materjali ohutuskaardid (MSDS-materjali ohutuskaart). TÄIENDAVAD MATERJALID JA TEHNIKA ALA 1. RNA ekstraheerimine kliinilises materjalis 1. komplekti reagendid RNA / DNA "ribo-aedpihlakas" (N) "ribo prep" (TU) või teiste soovitatud FBUN CRI Epidemiology töötamisel vorme täita 3, laminaarkaart. 3. Vortex. 4. Eppendorf-tüüpi torude mikrotsentrifuugid kuni 12000 g. 5. Eppendorf-tüüpi torude termostaat 25 kuni 100 ° C. 6. Muutuva mahuga automaatkarbid (5 kuni 50 μl, 20 μl 200 μl ja 100 μl kuni 1000 μl). 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 7 of 32

8 7. Ühekordselt kasutatav polüpropüleenist kinni keeratav või 1,5 ml tuubi tihedalt suletav. 8. Ühekordsed näpunäited filtritega kuni 100 μl, kuni 200 μl ja kuni 1000 μl statiividel. 9. Supernatandi eemaldamiseks vaakum-meditsiiniline aspiraator kolvi püüduriga. 10. Ühekordsed näpunäited kuni 200 μl ühe statiivi kohta. 11. Statiivid 1,5 ml torude jaoks. 12. Külmkapp 2 kuni 8 C. 13. Eraldage riietusrõivad, kübarad, kingad ja ühekordsed kindad vastavalt MU mahutavusele desinfitseerimislahusega. ZONE 2. Reverse transkriptsiooni ja amplifikatsiooni reaktsiooni teostamine reaalaja režiimis 1. Reaktiivkomplekt pöördtranskriptsioonireaktsiooni "REVERTA-L" (TU) teostamiseks konfiguratsioonivormide 3, bakteriaalse õhukeskkonna kasti (PCR kasti) töötlemisel. 3. Tsentrifuug / Vortex. 4. Muutuva mahuga automaatkarbid (5 kuni 50 μl ja 20 kuni 200 μl). 5. Ühekordsed näpunäited filtritega kuni 100 μl ja kuni 200 μl statiividel. 6. Statiivid 0,5 ml torude jaoks või 0,2 ml või 0,1 ml (vastavalt kasutatavate torude tüübile). 7. Külmkapp 2 kuni 8 С, sügavkülmikus ei tohi olla suurem kui miinus 16 C. 8. Erinevad riietusriided, kübarad, kingad ja ühekordsed kindad, vastavalt MU mahutavusele näpunäidete täitmiseks. Reverse transkriptsiooni reaktsiooni läbiviimisel, kasutades "REVERET-L": 10. Ühekordselt kasutatavad polüpropüleentorud mahuga 0,2 ml või 0,5 ml (olenevalt kasutatavast termostaadist või võimendist, milles teostatakse pöördtranskriptsiooni reaktsioon). 11. Termostaat Eppendorfi tüüpi torude jaoks 25 kuni 100 ° C või programmeeritava võimendi (näiteks Terzik (DNA Technology, Venemaa), Gradient Palm Cycler (Corbett Research, Austraalia), GeneAmp PCR System 2700 (Applied Biosystems USA)). 12. Kui pöördtranskriptsiooni reaktsiooni seadistatakse vähem kui 10 uuritud 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / p.8 kohta 32

9 näidist muutuva mahu automaatse jaoturiga (0,5-10 μl). 13. Kui pöördtranskriptsiooni reaktsiooni seadistatakse vähem kui 10 uuritud proovi puhul, on ühekordselt kasutatavad näpunäited filtri abil kuni 10 μl ühe statiivi kohta. PCR-komplektiga töötamisel: 14. Programmeeritavad pöördtüüpi võimendid (näiteks Rotor-Gene 3000 või 6000 (Corbett Research, Austraalia), Rotor-Gene Q (Qiagen, Saksamaa)) või tableti tüüpi võimendid (näiteks rattahoidja Iq5 (Bio-Rad, USA)) või SmartCycler II võimendi (Cepheid, USA) või Mx3000P, Mx3005P (Stratagene, USA) ja soovitatud Rospotrebnadzori Epidemioloogia Kesk-uuringute Instituudi FBUN soovitustega selle reagendi komplekti kasutamise kohta). 15. PCRi ühekordselt kasutatavad polüpropüleenist katseklaasid: a) tableti tüüpi seadme kasutamisel PCR-ga õhukese seinaga torud kumava korkiga (venitamata või katmata); b) pöörleva tüüpi seadmega, õhukese seinaga 0,2 ml PCR-katseklaasid, millel on lamedad korkid (koormuseta) või ribatorud mahuga 0,1 ml. c) 0,025 ml PCR torud (Cepheid, USA) SmartCycler II vahendiga (Cepheid, USA). 16. Märgistatud statiiv (kui kasutate tahvelarvuti tüüpi seadmeid). 17. Polüpropüleenist polüpropüleentorud PCR jaoks (lamekork, mittestandardne) 0,5 ml jaoks 18. Tsentrifuugimine ja katseklaasi hoidik (Cepheid, USA), kasutades SmartCycler II (Cepheid, USA). Materjali ühendamine, transportimine ja säilitamine Enne töö alustamist peaksite tutvuma metodoloogiliste juhistega "PCR-diagnostika kliinilise materjali võtmine, transportimine ja säilitamine", mille on välja töötanud FGUN TsNIIE Rospotrebnadzor, Moskva 2008. aastal. PCR-uuringu jaoks kasutatakse perifeerset vereplasm. Plasma saamiseks viiakse veri 3% EDTA lahusesse katseklaasi kiirusega 20: 1 (20 osa vere kohta 1 osa EDTA-st). Keerake suletud katseklaas veres mitu korda. 6 tunni jooksul vere kogumise hetkest alates tuleb plasma koguda ja viia uus tuub. Selleks tsentrifuugitakse verega katseklaasi 20 minutit g-ga, seejärel võetakse plasma ja viiakse eraldi eraldi ühekordselt kasutatavale 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / p.9 kohta 32

10 katseklaasi. Plasma saab säilitada mitte rohkem kui 3 päeva temperatuuril 2 kuni 8 ° C ja pikka aega temperatuuril, mis ei ületa minus 68 ° C. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 10 out of 32

11 FRT FORMAT FRT FORMAT KOOSTIS RIBO-Sorb reagendi komplekti versioon 50 reagendikomplekt RNA / DNA eraldamiseks kliinilisest materjalist sisaldab: Reaktiivi kirjeldus Mahu, ml Lk. Lüüsilahus Laotuseks pesemiseks 1 Lahendus pesemiseks 3 Lahendus pesemiseks, 5 1 viaali viaal 50 1 viaal 20 1 viaal Sorbent Valge suspensioon 1,25 1 toru RNA puhver 0,5 5 katseklaasid Reaktiivikomplekt on loodud selleks, et eraldada RNA / DNA 50 proovist, sealhulgas kontrollist. Komplekti kuulub 1 ja 4. Reibenti komplekti "RIBO-prep" versioon 50 reagendikomplekt kliinilisest materjalist pärineva RNA / DNA eraldamiseks sisaldab järgmist: Reaktiiv Kirjeldus Maht, ml Kogus Lahus lahustamiseks lüüsilahuse jaoks Lahus pesemiseks 3 lahus pesemine 4 RNA puhver Läbipaistev sinine värviline viaal 20 1 viaal 25 1 viaal 10 1 viaal 1,2 4 katsutid Reaktiivikomplekt on kavandatud 50 proovi, kaasa arvatud kontrollide, RNA / DNA eraldamiseks. Komplekti kuuluvad 2 ja 5 valikained. Reverse-L reagendi komplekti variant 50 reagendi komplekt 3-le. Kui lüüsiv lahus, lüüsilahus ja pesemislahus 1 säilitatakse temperatuuril 2 kuni 8 ° C, võib moodustuda sade kristallide kujul. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 11 of 32

12 FRT-vormingus cdna tootmiseks RNA-mallil on: RT-G-mix-1 RT-mix Revertase (MMlv) DNA puhver Reagent Kirjeldus Maht, ml 0,01 5 torud 0,125 5 torud 0,03 1 toru 1, 2 1 toru Reaktiivikomplekti versioon 50 on ette nähtud 60 pöördtranskriptsiooni reaktsiooni, sealhulgas kontrollide läbiviimiseks. PCR-komplekti reaktiivikomplekt. HCV cdna genotüüpide (1a, 1b, 2, 3a, 4) PCR-amplifitseerimise komplekti FRT-g1-4 versioon koos reaalajalise hübridiseerimise tuvastusega sisaldab: PCR mix-1- FRT HCV genotüübid 1b / 3a PCR segu-1-FRT HCV genotüübid 1a / 2 PCR segu-1-FRT HCV EKO / genotüüp 4 reagent Kirjeldus Maht, ml RT RT-PCR segu-2-FEP / FRT polümeraas (TaqF) HCV cdna PKO genotüübid 1b / 3a HCV cdna PKO genotüübid 1a / 2 PKO cdna HCV CTP / genotüüp 4 TE puhver 0.6 1 toru 0.6 1 toru 0.6 1 toru 0.3 3 toru 0,03 3 katseklaasi 0,2 1 katseklaasi 0,2 1 katseklaasi 0,2 1 katseklaasi 0,5 1 katseklaasi K Reaktiivikomplekt on mõeldud 55 testi jaoks (165 amplifikatsioonireaktsiooni), kaasa arvatud kontroll. Komplektide komplekti hulka 1, 2 ja 3. Valimiproovid kinnitatakse reaktiivikomplektile: 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 12 of 32

13 FRT FORMAT Reagent Kirjeldus Maht, ml OKO VKO STI-248-rec 0.5 1 toru 0,5 1 katseklaas Testkomplekt "PCR kit" versioon FRT-g1-6 komplekt cdna genotüüpide PCR amplifikatsiooniks ( Reaktsiooni hübridisatsiooni-fluorestsentsi tuvastamine hõlmab reagendi HCV-de määramist: reagent Kirjeldus Maht, ml PCR mix-1-FRT HCV genotüüpide arv 1b / 3a PCR-segu-1a, 1b, 2, 3a, 4, 5a, 6) 1-FRT HCV genotüübid 1a / 2 PCR-mix-1-FRT HCV VKO / genotüüp 4 PCR-mix-1-FRT HCV genotüübid 5a / 6 OT-PCR-mix-2-FEP / FRT polümeraas (TaqF) PKO cdna HCV genotüübid 1b / 3a PKO cdna HCV genotüübid 1a / 2 PKO cdna HCV EKO / genotüüp 4 PKO cdn HCV genotüübid 5a / 6 TE-puhver 0,6 1 katseklaas 0,6 1 katseklaas 0,6 1 katseklaas 0,6 1 katseklaas 0,3 4 katseklaasi 0,03 4 katseklaasi 0,2 1 katseklaasi 0,2 1 katseklaasi 0, 2 1 toru 0,2 1 toru 0,5 1 toru Reaktiivikomplekt on mõeldud 55 testi jaoks (220 amplifikatsioonireaktsiooni), kaasaarvatud juhtseadmed. Komplekt sisaldab komplekti 4, 5 ja 6 komplekti. Valikuperioodi juhtimisproovid on lisatud reaktiivikomplektile: 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 13 32

14 FRT FORMAT Reagent Kirjeldus Maht, ml OKO VKO STI-248-rec 0,5 1 katseklaas 0,5 1 katseklaas PCR-uuringute läbiviimine PCR-uuring koosneb järgmistest etappidest: RNA ekstraheerimine uuritavatest proovidest. Pöördtranskriptsiooni reaktsiooni läbiviimine. Amplifitseerimine hübridisatsiooni-fluorestsentsi tuvastamisega reaalajas režiimis. Tulemuste analüüs ja tõlgendamine. Üksikasjalik teave PCR-uuringute läbiviimise korra kohta oleneb kasutatavate seadmete tüübist on sätestatud reagendikomplekti kasutamisel meetodite kohta, et määrata kindlaks ja diferentseerida hepatiit C viiruse (HCV) genotüübid kliinilises materjalis polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) meetodil, kasutades hübridisatsiooni-fluorestsentsdetektorit " AmpliSense HCV-genotüüp-FL ", mille on välja töötanud FBUN Rospotrebnadzori epidemioloogia keskne uurimisinstituut. UURINGUTELE VÕIMALIKU RNA ERAKTSIOON TÄHELEPANU! RNAga töötamisel tuleb kasutada ainult ühekordselt kasutatavaid plastikmaterjale koos erimärgistega "RNasefree", "DNase-free". RNA ekstraheerimiseks kasutatakse Rospotrebnadzori FBUN TsNII Epidemioloogia soovitatavaid reagendikomplekte: RIBO-sorbi reagendi komplekti kasutamist vt 1. liites "RNA ekstraheerimine RIBO-sorbi reagendikomplekti abil". RIBO-prep reagendi komplekti kasutamisel vt 2. liites "RNA ekstraheerimine RIBO-prep reagendikomplekti abil". TÄHELEPANU! Saadud RNA preparaat ei allu säilitamisele, reaktsioon on vastupidine 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 14, 32

15 FORT FRT transkriptsiooni tuleks läbi viia kohe pärast RNA sondi saamist. REVERSAALSE TRANSPORTLIKU REAKTSIOONIDE VALMISTAMINE Reaktsioonisegu kogumaht on 20 ui, sealhulgas RNA proovi ruumala 10 ui. TÄHELEPANU! RNAga töötamisel tuleb kasutada ainult ühekordselt kasutatavaid plastikmaterjale koos erimärgistega "RNasefree", "DNase-free". A. Pöördtranskriptsiooni tuubide ettevalmistamine Reagentide ja RNA proovide sisestamiseks torudesse kasutatakse filtritega ühekordselt kasutatavaid näpunäiteid. TÄHELEPANU! Reaktsioonisegu komponendid tuleb vahetult enne pöördtranskriptsiooni reaktsiooni segada. 1. Enne töö alustamist sulatage see, segage põhjalikult vortex RT-mix ja RT-G-mix-1. Testimistoru mütsidest tühjendatakse tilgad. 2. Valige pöördtranskriptsiooni reaktsiooni jaoks vajalik arv torude mahtu 0,2 või 0,5 ml (olenevalt kasutatud termostaadi või võimendi mudelist), võttes arvesse testimis- ja kontrollproovide arvu (üks ekstraheerimise kontroll (OK)). Märgistage torud. 3. Proovide pöördtranskriptsioon: a) Valmistage reaktsioonisegu 12 reaktsiooni jaoks ette. Selleks lisage RT-seguga katseklaasi 5 μl RT-G-mix-1, segage põhjalikult vortexil ja sademe tilgad toru korgilt. b) Saadud lahusele lisatakse 6 μl revertatsi (MMlv), pipetitakse 5 korda, segatakse vortexiga. Tühjendage tilgad toru kaas läbi lühikese tsentrifuugimisega. 4. Vähem kui 10 prooviga pöördtranskriptsiooni teostamisel: Reaktsioonisegu valmistamiseks on vaja reagente 1 reaktsiooni kohta segada järgmises järjekorras järgmises järjekorras: 10 μl RT-mix, 0,4 μl RT-G-mix-1 ja 0, 5 μl revertatsi (MMlv) (vt ka tabelit 1). Kui lisatakse RT-G-mix-1 ja revertatseeni (MMlv) segule, pipeteerige iga reagent vähemalt 5 korda. Segu segatakse hoolikalt vortexil ja sadetakse tilguti toru korgilt. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 15 of 32

16 FRT TÄHELEPANU! Revertase (MMlv) on kuumustundlik! Ärge jätke seda toatemperatuuril pikka aega! Kohe pärast kasutamist pane külmik külmikusse! Reaktiivi kogus reaktsiooni kohta (μl). Kliiniliste proovide arv. Reaktsioonisegu valmistamise skeem 10,00 0,4 0,5 RT-mix RT-G-mix-1 revertas (MMlv), 4 3,, 8 3,, 2 4,, 6 4,, 0 5,0 5. Lisage ettevalmistatud torudesse 10 μl valmistatud reaktsioonisegu. Tabel 1 6. Lisage 10 μl kliinilisest ja kontrollproovist eraldatud RNA proovid valmiskujunditele vastavalt märgistusele. Vortex õrnalt ja sadestub viaalist korgiga. TÄHELEPANU! RIBO-sorbi reagendi komplektiga eraldatud RNA proovide lisamisel tuleks reaktsioonisegus väldida sorbenti. B. Pöördtranskriptsioonireaktsiooni läbiviimine 1. Asetage tuubid 30 minutit võimendisse (termostaat) 37 ° C juures. TÄHELEPANU! Pöördtranskriptsiooni "reaalajas" tuvastussüsteemi võimendite kasutamisel on vajalik programmeerida seade vastava programmi läbiviimiseks (vt tabelit 2 ja "Reaktiivikomplekti juhised hepatiit C viiruse (HCV) genotüüpide avastamiseks ja eristamiseks") kliinilises materjalis polümeraasi ahelreaktsiooni meetodil (PCR) hübridisatsiooni-fluorestsentsdetektoriga "AmpliSense HCV-genotüüp-FL" ", mille on välja töötanud FBUN Kesk Epidemioloogia Instituut Rospotrebnadzor). Tabel 2 4 Sisestatud reaktiivide kogused on antud, võttes arvesse uuritud proovide arvu (kliinilised proovid ja 1 kontroll RNA ekstraheerimisetapi kohta) ja reserv ühe proovi kohta. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 16 32-st

17 FRT FORMAT Programm võimendite pöördtranskriptsiooni reaktsiooni teostamiseks reaalajas tuvastussüsteemiga 5 Astme temperatuur, C Etapi kestus Fluorestsentsmõõtmine Tsüklite arv min 1 2. Pärast reaktsiooni lõppu lisatakse katseklaasidesse 20 ui DNA puhvrit, kasutades uut filtri otsik iga prooviga. Segatakse õrnalt vorteksil ja sademe tilgad viaali korkist. PCR amplifikatsioonis kasutatakse pöördtranskriptsiooni reaktsioonis saadud CDNA-d. Valmistatud cdna preparaati võib säilitada vähemalt 1 ndal temperatuuril vähemalt -16 ° C või aasta jooksul temperatuuril, mis pole suurem kui -68 ° C. AMPLIFIERIMISE TÄITMINE REAL-TIME REŽIIMI MÄÄRAMISE KOHTA A. Amplifikatsiooniventilaatorite valmistamine Võimendite torude valik sõltub kasutatavast võimendist. Reagentide, cdna proovide ja kontrollproovide sisestamiseks katseklaasidesse kasutatakse filtrite ühekordselt kasutatavaid näpunäiteid. Reaktsioonisegu kogumaht on 25 ui, sealhulgas proovi ruumala cdna 10 ui. TÄHELEPANU! Reaktsioonisegu komponendid tuleb segada vahetult enne PCR-uuringute läbiviimist. Vastavalt arvutustabelile on nõutav reaktsioonide arv, mis põhineb nõutaval arvul reaktsioonidel, sealhulgas katsetamine ja kontrollproovid (vt tabelid 3, 4). A1. Amplifikatsioonitorude ettevalmistamine PCR komplekti abil, versioon FRT-g1-4 5 Näiteks Rotor-Gene 3000 või 6000 (Corbett Research, Austraalia); Rotor-Gene Q (Qiagen, Saksamaa); iq5 (Bio-Rad, Ameerika Ühendriigid); Mx3000P (Stratagene, Ameerika Ühendriigid); "DT-96" ("DNA-tehnoloogia", Venemaa) ja soovitatud Rospotrebnadzori epidemioloogia keskuse uurimisinstituudi FBUN soovitusi selle reagendikomplekti kasutamiseks. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 17 of 32

18 FRT VORMAT 1. Enne töö alustamist sulatage sulatamine, keerutage kõik komplekti reaktiivid ja sadestades katseklaasi korgidesse tilgad. 2. Valige vajalik amplifitseerimistorude arv, võttes arvesse testide ja kontrollproovide arvu (üks RNA ekstraheerimise kontroll, kaks amplifikatsiooni kontrolli). Torude tüüp valida sõltuvalt kasutatavast seadmest. TÄHELEPANU! Iga proovi analüüsitakse kolme reaktsioonisegu abil, nii et iga proovi jaoks on vaja valmistada 3 toru. Pöörleva tüübi seadmete kasutamisel märkige vastavalt torud "sample_1b / 3a", "sample_1a / 2" ja "sample_vko / 4". Kui kasutate tahvelarvuti tüüpi seadmeid, kasutage selleks tähistatud statiivi. 3. Valige reaktsioonisegude valmistamiseks kolm 0,5 ml katseklaasi. Märgistage torud "1b / 3a", "1a / 2" ja "VKO / 4". 4. Reaktsioonisegude valmistamiseks mõeldud kolmest katseklaasist lisatakse 1 reaktsioon: 5 μl RT-PCR segu-2-FEP / FRT, 0,5 μl polümeraasi (TaqF) ja 10 μl vastavat PCR-i segu HCV -1-FRT genotüüp (vt ka tabel 3), HCV genotüüpide 1b / 3a PCR mix-1-FRT, mis viiakse torusse "1b / 3a" jne Saadud reaktsioonisegud segatakse vortexil ja sademe tilgad viaali korkist. TÄHELEPANU! Reaktsioonisegud tuleb valmistada 1 prooviga (vt tabel 3). 5. Lisage amplifitseerimiseks mõeldud katseklaasidesse 15 μl valmistatud reaktsioonisegu vastavalt märgisele, s.t. reaktsioonisegu "1b / 3a" viiakse katseklaasidesse, mis on märgistatud "proov_1b / 3a" jne. 6. Lisage 10 μl cdna-proove, mis on saadud pöördtranskriptsiooni reaktsiooniga valmistatud katseklaasid koos dispergeeritud reaktsioonisegudega vastavalt märgistusele ja iga proovi, sealhulgas negatiivne ekstraheerimise kontroll (OK), tuleb lisada 3 katseklaasi, mis sisaldavad hajutatud reaktsiooninumbreid. "1b / 3a", "1a / 2" ja "VKO / 4" segu. 7. Pange kontrollreaktsioonid sisse: a) Lisage 10 μl TE-puhvrile katseklaasidesse 1b / 3a, 1a / 2 ja BKO / 4 kilega reaktsioonisegud negatiivne kontroll PCRi (K) kohta. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 18, 32

19 FRT FORMAT b) PCRi positiivne kontroll (K + 1b / 3a) reaktsioonisegu "1b / 3a" tuubis, lisatakse 10 ui OTP cdna HCV genotüüpe 1b / 3a; c) PCR-i (K + 1a / 2) positiivne kontroll reaktsioonisegus "1a / 2" asuvas katseklaasis lisatakse 10 ui OTP cdna HCV genotüüpe 1a / 2; d) PCRi positiivne kontroll (K + VKO / 4) VKO / 4 reaktsiooniseguga katseklaasis lisatakse 10 ui PKO cdna HCV EKO / genotüübi 4. Reaktsioonisegude ettevalmistamise skeem FRT variandi jaoks Reagendi maht reaktsiooni kohta (μl) punktide kliiniliste uuringute proovid 6 10,00 5,00 0,50 6 Kliiniliste proovide arv + 1 kontroll RNA + 2 kontroll-PCR ekstraheerimisfaasi (N + 3, N kliiniliste proovide arv). PCR mix-1-FRT HCV genotüüp * RT-PCR mix-2-FEP / FRT * Tabel 3 Polümeraas (TaqF) *,,,,,,,,, 0 * Rakendatavate reagentide mahud on antud 1 prooviga. A2. Amplifikatsioonitorude ettevalmistamine, kasutades PCR komplekti reagendi komplekti versiooni FRT-g Enne töö alustamist sulatage, segage kõik virnaga komplekti reagendid ja sademe katseklaasi korgidelt tilgad. 2. Valige vajalik amplifitseerimistorude arv, võttes arvesse testide ja kontrollproovide arvu (üks RNA ekstraheerimise kontroll, kaks amplifikatsiooni kontrolli). Torude tüüp valida sõltuvalt kasutatavast seadmest. TÄHELEPANU! Iga proovi analüüsitakse, kasutades nelja reaktsioonisegu, nii et iga proovi jaoks on vaja valmistada 4 toru. Torujuhtmete puhul, mille ruumala on 0,2 ml rootori tüüpi instrumentide jaoks, märkige vastavalt proovid "specimen_1b / 3a", "specimen_1a / 2", "specimen_vko / 4" ja "specimen_5a / 6". Kui kasutate tahvelarvuti tüüpi seadmeid või triibunud 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lehekülgi 19 32

20 pöörleva tüüpi instrumendiga FRT FORMAT torud kasutavad sel eesmärgil märgistatud statiivi. 3. Valige reaktsioonisegude valmistamiseks neli 0,5 ml katseklaasi. Märgistage torud "1b / 3a", "1a / 2", "VKO / 4" ja "5a / 6". 4. Reaktsioonisegude ettevalmistamiseks mõeldud neljast katseklaasist lisatakse kuni 1 reaktsiooni: 5 μl RT-PCR mix-2-FRT HCV genotüüpi (vt ka tabel 4), kasutades PCR mix-1- HCT FRT genotüübid 1b / 3a sisestatakse torusse "1b / 3a" jne. Saadud reaktsioonisegud segatakse vortexil ja sademe tilgad viaali korkist. Reaktsioonisegude ettevalmistamise skeem FRT-variandi jaoks Reaktiivi maht reaktsiooni kohta (μL) Arv Kliiniliste proovide proovide arv 7 10,00 5,00 0,50 FEP / FRT, 0,5 μl polümeraasi (TaqF) ja 10 μl vastava PCR-i segu -1- PCR mix-1-FRT HCV genotüüp * RT-PCR segu-2- FEP / FRT * Tabel 4 Polümeraas (TaqF) *,,,,,,,,, 0 lisatud reagentide kogused on varustatud 1 proov. 5. Lisage amplifitseerimiseks mõeldud katseklaasidesse 15 μl valmistatud reaktsioonisegu vastavalt märgisele, s.t. reaktsioonisegu "1b / 3a" viiakse katseklaasidesse, mis on märgistatud "proov_1b / 3a" jne. Kui reaktsioonis kasutatakse triibuliste torude amplifikatsiooni, tuleks reaktsioonisegud sisestada vastavalt joonisel 1 kujutatud skeemile. 7 RNA + 2 kontroll-PCR-i ekstraheerimise etapi kliiniliste proovide arv + 1 kontroll (N + 3, N kliiniliste proovide arv). 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lehekülg 20 32-st

21 FRT FORMAT 4 katseklaasi, mida kasutatakse ühe kliinilise proovi valmistamiseks. Segu "1b / 3a" Segu "1a / 2" Segu "VKO / 4" Segu "5a / 6" Segu "1b / 3a" Segu "1a / 2" Segu BKO / 4 "Segu" 5а / 6 "Joonis 1. Reaktsioonisegude ja -proovide sisestamise skeem, kui kasutatakse PCR-i jaoks riba torusid. 6. Lisage 10 μl cdna-proove, mis on saadud pöördtranskriptsiooni reaktsiooniga valmistatud katseklaasid koos dispergeeritud reaktsioonisegudega vastavalt märgistusele ja iga proovi, sealhulgas negatiivne ekstraheerimise kontroll (OK), lisatakse 4 katseklaasi, mis sisaldavad hajutatud reaktsiooni segu "1b / 3a", "1a / 2", "VKO / 4" ja "5a / 6" segu. 7. Pange kontrollreaktsioonid sisse: a) lisage katseklaasidesse 1B / 3a, 1a / 2, VKO / 4 ja 4a / 6a 10 ui TE-puhvri reaktsioonisegude negatiivne kontroll PCRi (K) kohta. b) PCR-i (K + 1b / 3a) positiivne kontroll reaktsioonisegus "1b / 3a" asuvas katseklaasis lisatakse 10 ui OTP cdna HCV genotüüpidest 1b / 3a; c) PCR-i (K + 1a / 2) positiivne kontroll reaktsioonisegus "1a / 2" asuvas katseklaasis lisatakse 10 ui OTP cdna HCV genotüüpe 1a / 2; d) PCRi positiivne kontroll (K + VKO / 4) katseklaasis reaktsiooniseguga VKO / 4, lisatakse 10 ui PKO cdna HCV VKO / genotüüp 4; e) PCR-i (K + 5a / 6) positiivne kontroll reaktsioonisegu "5a / 6" katseklaasis, lisatakse 10 ui OTP cdna-HCV genotüüpe 5a / 6. B. Režiimilisel režiimil avastamise abil amplifitseerimine 1. Programmeerige instrument (võimendi koos reaalajas režiimil oleva tuvastussüsteemiga) sobiva võimendusprogrammi täitmiseks ja fluorestsentssignaali "AmpliSens-1" tuvastamiseks (vt tabelid 5, 6 ) Tabel 5 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 21 32-st

22 FRT FORMAT Programm Amplisens-1 pöörleva tüüpi seadmetele 8 Temperatuur, kestus Mõõtmismääramine Hoidmis- / hoidmistsüklite fluorestsentsi etapi C faas min 1 Temperatuur 95 5 s Rattasõit / s 5 Rattasõit 95 5 s Rattasõit 2 / FAM / roheline, s 40 Cycle 2 JOE / Yellow s Tabel 6 Tablet-tüüpi seadmete 9 ja Smart Cycler II (Cepheid, USA) programm AmpliSens-1 Step Temperatuur, kestus Mõõtmine C tsüklite fluorestsentsi etapp min (900 s 10 s) s 95 5 sekundit FAM, JOE / HEX / Cy abil 2. Paigaldage seadme reaktsioonimooduli karkassidesse torud. 3. Alustage amplifitseerimisprogrammi täitmist fluorestseeriva signaali tuvastamisega. 4. Programmi lõpus jätkake tulemuste analüüsi ja tõlgendamist. ANALÜÜS JA TULEMUSTE TÕLGENDAMINE Tulemuste analüüs tehakse, kasutades tarkvara, mida PCR-i abil kasutatakse c-de määramiseks reaalajas. Fluorestsentsi signaali akumulatsioonikõveraid analüüsitakse FAM-i fluorofoori (või sarnase) kanali ja JOE-fluorofoori (või sarnase) kanali jaoks. Tulemusi tõlgendatakse vastavalt 8 (näiteks Rotor-Gene 3000 või 6000 (Corbett Research, Austraalia), Rotor-Gene Q (Qiagen, Saksamaa) olemasolule (või puudumisele)). 9 Näiteks ratsakk iq5 (Bio-Rad, USA); Mx3000P, Mx3005 (Stratagene, Ameerika Ühendriigid); Reaktiivikomplekti kasutamisjuhistes soovitas Rospotrebnadzori Epidemioloogia Keskravi FBUN-i soovitusel "DT-96" ("DNA-Technology", Venemaa). 10 Seadme Smart Cycler II jaoks (Cepheid, USA). 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 22 32-st

Fluorestsentskõvera ristumise FRT-vorming koos vastava tasemega määratud lävejoonega määrab selle näidise cdna olemasolu (või selle puudumise) lävitsükli Ct väärtus vastavas graafikus tulemuste tabelis. Kanali amplifitseerimise tulemus loetakse positiivseks, kui fluorestsentsi kõveral on reaalajaline PCR-i tüüpiline S-kujuline pilt, kui see on ületatud olulise fluorestsentsi kasvu piirkonnas, lävijoonest, negatiivne, kui puudub tüüpiline kõver ja ristmik ei ole lävimisjoon (Ct-väärtus puudub või Cp) ja kõikidel muudel juhtudel kahtlane. Tabelis 7 on näidatud kanalid, mille abil HCV genotüübid tuvastatakse iga reaktsioonisegu jaoks. Tabel 7 Reaktsioonisegu "1b / 3a" "1a / 2" "VKO / 4" "5a / 6 11" Kanal Määratletavad genotüübid HCV FAM / Roheline 1b 1a VKO 5a JOE / HEX / Kollane / Cy3a Tulemuste registreerimine kontrollproovides Tulemused PCR-uuringud loetakse usaldusväärseks, kui kontrollparameetrite läbimise kohta on saadud õiged tulemused vastavalt kontrollreaktsioonide tulemuste hindamise tabelile (vt tabel 8). 11 PCR komplektis on variant FRT-g1-6. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 23 of 32

24 FRT FORMAT Reaktsioonisegu Kontroll OK K K + 1b / 3a PCR-analüüsi erinevate etappide kontrollimise tulemused FAM / Roheline Nr Ct-väärtus Puuduv Ct-väärtus Alla piirväärtuse tabelist 8 "1b / 3a" "1a / 2" "BKO / 4 »« 5a / 6 »12 JOE / HEX / Yellow / Cy3 kanali amplifikatsiooni tulemused FAM / Roheline JOE / HEX / Kollane / Cy3 FAM / Roheline JOE / HEX / Kollane / Cy3 FAM / Roheline JOE / HEX / Kollane / Cy3 Puuduv väärtus Ct puuduv Ct väärtus Alla piirväärtusest K + 1a / 2 * * puudub Ct väärtus puudub Ct väärtus puudub Ct väärtus puudub Ct väärtus piirväärtusest allpool puuduv Ct väärtus puudub Ct väärtus puudub Ct väärtus puudub Ct väärtus puudub Ct väärtus puudub Ct väärtus puudub Ct väärtus puudub * * * * * * Piirväärtusest allpool K + Vko piirväärtuse allpool / 4 * * * * * * * * Piirväärtusest allpool K läviväärtust allpool + 5a / 6 * * * * * * * Seda reaktsioonisegu ei testitud. * * Piirväärtuse alt TÄHELEPANU! Ct piirväärtused on märgitud PCR-komplekti sisestusse. Tulemuste registreerimine uuritud kliinilistes proovides Piirväärtusest allpool 1. Selles proovis esinev HCV genotüüp leitakse, võrreldes amplifikatsiooni tulemusi kolme (PCR komplekti, FRT-g1-4 variandi) või nelja toruga (PCR komplekti jaoks variant FRT-g1-6) vastavalt tabelile. 7, lisaks: a) Kui proovi jaoks määratakse proovi Ct väärtus, mis vastab ühele HCV RNA genotüübile, on tulemuseks "genotüüp"; b) Kui tulemuste tabelis on näidisele kaks või enam Ct väärtust, siis antakse välja topelt-, kolmik- jms genotüüp. Erandiks on järgmine juhtum: kui VKO / 4 reaktsioonisegu proovil on määratud Ct väärtused läbi JOE / HEX / Yellow / Cy3 kanali (4 HCV genotüübiga) ja FAM / rohelise kanali 1b / 3a reaktsioonisegul (1b HCV) ja neljanda genotüübi Ct väärtus on esimese genotüübi jaoks 10 või enama tsükliga rohkem kui 10 Ct, siis PCR komplekti kuulub 12 FRT-g1-6 variant. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 24 32-st

25 FRT FORMAT on "Genotüübi 4" tulemus. 2. Kui proovi tulemuste tabelis on Ct väärtus määratud ainult CTP jaoks (reaktsioon CTP / 4, kanal FAM / roheline) ja see on allpool sisestuses näidatud piirväärtust, siis on tulemus "HCV genotüüp pole määratud". Veelgi enam, kui on teada, et HCV RNA kontsentratsioon selles proovis on reaktiivikomplekti analüütilises tundlikkuses, annab tulemuseks "HCV genotüüb ei ole määratud madala viiruskoormuse tõttu". 3. Kui proovide tulemuste tabelis ei leidu kõigi genotüüpide Ct tulemusi, siis ASD Ct väärtus (FV kanali kaudu PCV segude-1-FRT HCV EKO / genotüüp 4) ei ole määratletud või ületab piiri (näidatud sisestuses); Selle proovi PCR-uuring tuleb korrata alates RNA ekstraheerimise etapist. TÄHELEPANU! 1. Kui Ct väärtus vähemalt ühes PCR-etapi positiivse kontrolliga proovis (K + 1b / 3a, K + 1a / 2, K + VKO / 4 või K + 5a / 6) ületab sisestuses määratud piirväärtust või puudub, on vajalik korrake kõigi proovide PCR-analüüsi, alustades ekstraktsioonietapist. 2. Kui RNA (OC) ekstraheerimise negatiivne kontroll vähemalt ühe reaktsioonisegu "1b / 3a", "1a / 2", "5a / 6" mööda mis tahes kasutatud kanalit ja / või reaktsioonisegust "VKO / 4" "Positiivne signaal tuvastatakse JOE / HEX / Yellow / Cy3 kanalil, on vaja korrata PCR-uuringu kõigi proovide puhul, mille HCV genotüüp määrati selles reaktsioonisegus, alustades RNA ekstraheerimisetapist. 3. Kui negatiivse PCR-kontrolliga (K) tuvastatakse positiivne signaal mis tahes reaktsioonisegule mis tahes kanali juures, tuleb korrata PCR-uuringu kõigi proovide puhul, mille HCV genotüüp määrati selles reaktsioonisegus, alustades RNA ekstraheerimisastmest. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 25 of 32

26 SHELF LIFE, TRANSPORDI- JA KORRALISE TINGIMUSE KUUPÄEV Kehtivusaeg. 12 kuud Aegunud reagendi komplekt ei ole rakendatav. Aktiivsete reagentide aegumiskuupäev vastab avamata reagentide etiketil märgitud aegumiskuupäevale, kui juhendis ei ole teisiti märgitud. Transport Reaktiivide komplekti tuleks transportida temperatuuril 2 kuni 8 ° C mitte rohkem kui 5 päeva. Vastuvõtmisel demonteerige vastavalt ettenähtud säilitamiskiirusele. Ladustamine REVERTA-L ja "PCR kit" reagendi komplektid, välja arvatud OKO, TE-puhvri ja CTP STI-248-rec'i, säilitatakse "RIBO-sorb" ja "RIBO-prep" reagendi komplektid temperatuuril 2 kuni 8 ° C. säilitatakse temperatuuril, mis ei ületa -16 ° C. PCR-komplekti EYE, TE-puhvrit ja CTP STI-248-rec tuleb hoida temperatuuril 2 kuni 8 ° C. PCR mix-1-FRT HCV genotüübid 1b / 3a, HCV PCR mix-1-FRT genotüübid 1a / 2, HCV BKO / genotüüp PCR mix-1-FRT HCV / genotüüp 4 ja PCR mix-1-FRT HCV genotüübid 5a / 6 tuleks säilitada pimedas kohas. Puhkusetingimused. Ravi-ja-profülaktika-ja sanitaarasutuste. Kaebused AmpliSense HCV-genotüübi-FL reagendikomplekti kvaliteedi kohta tuleb saata ehitise ja koolituse osakonna epidemioloogia Rospotrebnadzori (Moskva, Novogireevskaya, 3a) föderaalse teadus- ja arendusinstituudi (495), faks (495). AmpliSense toodete kohta saate arvustusi ja soovitusi välja jätta, täites veebisaidil tarbijaprofiili: 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 26 of 32

27 RNA ekstraheerimise lisa 1. RNA ekstraheerimine RIBO-sorbi reagendikomplekti abil. Menetlus 1. Lüüsilahus ja pesemislahus 1 (kui säilitatakse 2-8 ° C juures), kuumutatakse 60 ° C juures, kuni kristallid on täielikult lahustunud. 2. Valige soovitud arv 1,5 ml ühekordse kasutusega torusid (kaasa arvatud negatiivne ekstraheerimise kontroll). Märgistage torud. 3. Iga toru põhjaga tehakse 10 μl CTP STI-248-rec. 4. Lisage torudesse 450 μl lüüsivat lahust. Märgistage torud. Märkus. Valikumenetluse hõlbustamiseks on suur proovide hulk lubatud segada eraldi lüütilahuse ja CTP STI-248-rec (proovis, 450 ui lüüsilahuses ja 10 ui CTP STI-248-rec) eraldi viaalis, millele järgneb eraldamine 450 ui segu ettevalmistatud torudesse 1,5 ml. 5. Lüüsilahuse ja ASD katseklaasis asetatakse 100 μl proovi, kasutades filtri abil näpunäiteid. Negatiivse kontrolli (OK) ekstraheerimise katseklaasis lisatakse 100 μl negatiivset kontrolli. 6. Tihedalt suletud proovid tuleb põhjalikult segada pöörisse ja tsentrifuugida 5 s kiirusel 5 tuhat pööret minutis mikrotsentrifuugi abil, et eemaldada tilgad toru korgi sisemisest pinnast. 7. Sorbendi resuspendeeritakse tugeva vortexi abil. Lisage igasse torusse 25 ui resuspendeeritud sorbenti eraldi otsaga. 8. Sega tuubide sisu vortexile ja jäetakse 10 minutiks toatemperatuurile, segades hoolikalt iga 2 minuti järel. 9. Mikrotsentrifuugimünt tsentrifuugitakse 1 minutiks 7000 g (näiteks 10 000 p / min MiniSpini, Eppendorfi tsentrifuugiga). 10. Eemaldage igast torust supernatant eraldi otsaga, kasutades vaakum aspiraatorit. 11. Lisage torudesse 400 μl pesulahust. 1. Vortex, kuni sorbent on täielikult resuspendeeritud. Tsentrifuugige katseklaase tsentrifuugis 7000 g juures 1 min. Valige supernatant 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lehekülg 27, 32

28 RNA ekstraheerimine igast katseklaasist koos eraldi otsaga, kasutades vaakumpiraatorit. 12. Lisage torudesse 500 μl pesulahust. 3. Vortex, kuni sorbent on täielikult resuspendeeritud. Tsentrifuugige katseklaase tsentrifuugis 7000 g juures 1 min. Eemaldage igast katseklaasist pesemislahus 3 eraldi otsaga, kasutades vaakum aspiraatorit. 13. Lisage torudesse 400 μl pesulahust. 4. Keerake vorteks, kuni sorbent on täielikult resuspendeerunud. Tsentrifuugige katseklaase tsentrifuugis 7000 g juures 1 min. Valige igast katseklaasist pesemislahus 4 eraldi otsaga, kasutades vaakum aspiraatorit. 14. Kuivatage sorbent, asetades katseklaasid avatud katted 15 minutit termostaadiga temperatuuril 60 ° C. 15. Sorbendi resuspendeeritakse 50 ui RNA puhvris. Kuumutage termostaadiga temperatuuril 60 ° C 2 minutit, segage veekihiga ja sadetage sorbent tsentrifuugis 12 000 g juures (näiteks MiniSpini, Eppendorfi tsentrifuugiga pöörded minutis) 1 minuti jooksul. TÄHELEPANU! Saadud RNA preparaati ei saa säilitada, tuleb pöördtranskriptsiooni reaktsioon läbi viia kohe pärast RNA proovi saamist. Reaktsioon RNA lahust tuleb valida väga hoolikalt, sorbendi hõivamiseks. Kui sorbent segatakse, tuleb seda sadestada tsentrifuugis. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 28 of 32

29 RNA ekstraheerimise lisa 2. RNA ekstraheerimine RIBO-prep-reagendi komplekti abil. Menetlus 1. Lüüsilahus (kui seda hoiti temperatuuril 2-8 ° C) kuumutatakse temperatuuril kuni 65 ° C kuni kristallide täieliku lahustumiseni. 2. Valige soovitud arv 1,5 ml ühekordselt kasutatavaid torusid (kaasa arvatud negatiivsed ja positiivsed ekstraheerimise kontrollid). 3. Iga toru põhjaga tehakse 10 μl CTP STI-248-rec. 4. Lisage katseklaasidesse 300 μl lüüsi lahust. Märgistage torud. Märkus Protsesside suuremahulise kogusega, mis hõlbustab jaotamisprotseduuri, on lubatud segada lahus ja CTP STI-248-rec (lll proovi, 300 ui lüüsilahuse ja 10 ui CTP STI-248-rec) eraldi viaalis, millele järgneb 300 μl segu ettevalmistatud 1,5 ml tuubidesse. 5. Lüüsilahuse ja EKR-i lahustega katseklaasid lisatakse 100 μl iga proovi, kasutades filtri abil näpunäiteid. Negatiivse kontrolli (OK) ekstraheerimise katseklaasis lisatakse 100 μl negatiivset kontrolli. 6. Torude sisu viirutada, tsentrifuugitakse 5 sekundit mikrotsentrifuugi abil, et tilgad eemaldada kaane sisepinnast ja kuumutatakse termostaadis temperatuuril 65 ° C 5 minutit. 7. Torudesse lisatakse 400 ui sadestamise lahust, segatakse põhjalikult vortexil. 8. Tsentrifuugige mikrotsentrifuugiklaasi 12 000 g juures (näiteks MiniSpini, Eppendorfi tsentrifuugiga pöörded minutis) 5 minutit. 9. Supernatant eemaldatakse ettevaatlikult, sademe puudutamata, vaakum imemisseadme ja iga prooviga eraldi otsa abil. 10. Lisage torudesse 3 500 μl pesulahust, tihedalt tihendage kaante, loputage setit, loputage torud 3-5 korda. Protseduuri on võimalik üheaegselt läbi viia kõigi torude jaoks, selleks on vaja katteid torudes asetada kaanega või teise statiiviga ülaosas, neid vajutada ja pöörama statiivi üle. 11. Tsentrifuugige mikrotsentrifuugis 1-2000 g juures 1-2 minutit. 12. Hoidmata sadet hõivamata, vali supernatant, 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / leheküljel 29 32

30 RNA EKSTRAHEERIMINE, kasutades vaakum aspiraatorit ja iga proovi jaoks eraldi otsa. 13. Lisage torudesse 200 μl pesemislahust 4, tihedalt tihedalt kaanega ja loputage sete hoolikalt, keerates torud 3-5 korda. Protseduuri on võimalik üheaegselt läbi viia kõigi torude jaoks, selleks on vaja katteid torudes asetada kaanega või teise statiiviga ülaosas, neid vajutada ja pöörama statiivi üle. 14. Tsentrifuugige 12 000 g juures 2 minutit mikrotsentrifuugi abil. 15. Ettevaatlikult, ilma sademe hõivata, vali hoolikalt supernatant, kasutades vaakum-aspiraatorit ja iga proovi jaoks eraldi otsa. 16. Asetage katsutid 5-minutilise termostaadi temperatuuril 65 ° C sademe kuivamiseks (torude korgid tuleb avada). 17. Lisage torudesse 50 ui RNA puhvrit. Sega keeris. Paigaldage termostaat temperatuuril 65 ° C 5 minutit, aeg-ajalt loksutades pöörisse. 18. Tsentrifuugige torusid tsentrifuugiga 1 tund 12 000 g juures. Supernatant sisaldab puhastatud RNA-d. Proovid on valmis pöördtranskriptsiooni ja PCR-i reaktsiooni moodustamiseks. TÄHELEPANU! Saadud RNA preparaati ei saa säilitada, tuleb pöördtranskriptsiooni reaktsioon läbi viia kohe pärast RNA proovi saamist. 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 30 32-st

31 TRÜKITUD TOODETES KASUTATUD SÜMBOLID Katalooginumber Partii kood Ettevaatust! Vältige otsest päikesevalgust. Valmistamis kuupäev Tootja 2x (RG, IQ, Mx, Dt, SC) / VER / p. 31 32-st

32 Rev. LA IvI Kust muudatused teha? Jalakäijate jalajälg Muutmiste nimekiri muudatuste sisu Sisseehitatud kataloogi number lisatud kataloogi number R-V1-G (1-4) - 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) konfiguratsioonide vormide 1 ja 4 puhul 2x (RG, iQ, Mx, Dt, SC) / VER / lk 32 32

Amplisens hcv fl

Hepatiidi etappid c
Mpiviropack Price

Kõik C-hepatiidi kohta

Ravi, sümptomid, ravimid

Hepatiit koos rna amplicens hcv fl

Hepatiit koos rna amplicens hcv fl

Hepatiit on maksa äge ja krooniline põletikuline haigus, mitte kesknärvisüsteem, kuid laialt levinud. Erineva hepatiidi korral on infektsiooni meetodid erinevad, nad erinevad ka haiguse progresseerumise kiirusest, kliinilistest ilmingutest, ravimeetoditest ja prognoosidest. Isegi erinevate hepatiidi tüüpide sümptomid on erinevad. Lisaks ilmnevad mõned sümptomid tugevamad kui teised, mis on määratud hepatiidi tüübi järgi.

Peamised sümptomid

  1. Kollane Sümptom on tavaline ja sellepärast, et bilirubiin siseneb patsiendi verd maksakahjustuse korral. Keha kaudu ringlev vere levib selle läbi elundite ja kudede, maalides neid kollaseks.
  2. Valu ilmumine paremas hüpohoones. See tekib maksa suuruse suurenemise tõttu, mille tagajärjel ilmneb valu, mis on igav ja pikenenud või on paroksüsmaalne.
  3. Tervise halvenemine, millega kaasneb palavik, peavalud, pearinglus, seedehäire, unisus ja letargia. Kõik see on bilirubiini keha toimemehhanismi tagajärg.

Hepatiit äge ja krooniline

Hepatiidi haigetel on ägedad ja kroonilised vormid. Ägeda kujuga ilmnevad nad maksa viirusliku kahjustuse korral ja ka siis, kui mürgitust on esinenud mitmesuguste mürgiste ainetega. Selle haiguse ägedate vormide korral halveneb patsientide seisund kiiresti, mis aitab kaasa sümptomite kiirele arengule.

Selle haigusvormiga on üsna võimalik soodsad prognoosid. Välja arvatud see, et see muutub krooniliseks. Ägeda kujuga haigus on kergesti diagnoositud ja kergem ravida. Ravimata äge hepatiit muutub krooniliseks. Mõnikord on raske mürgistus (näiteks alkohol), krooniline vorm toimub iseseisvalt. Hepatiidi kroonilises vormis tekib maksa rakkude ja sidekoe asendamise protsess. See on nõrgalt ekspresseeritud, see on aeglane ja seetõttu on mõnikord diagnoositud kuni maksa tsirrooseni. Kroonilist hepatiiti ravitakse halvemini ja selle ravimise prognoos on ebasoodsam. Haiguse ägedas kulguses halveneb heaolu, tekkib kollatõbi, levib mürgistus, maksa funktsionaalne funktsioon väheneb ja bilirubiinisisaldus veres suureneb. Akuutse hepatiidi õigeaegne avastamine ja efektiivne ravi patsient taastub kõige sagedamini. Kui haigus kestab üle kuue kuu, muutub hepatiit krooniliseks. Haiguse krooniline vorm põhjustab organismis tõsiseid häireid - põrn ja maks on suurenenud, ainevahetus on häiritud, tekkivad sellised komplikatsioonid nagu maksatsirroos ja onkoloogilised vormid. Kui patsient alandab immuunsust, ei ole raviskeem õige või alkoholisõltuvus, siis üleminek hepatiidi kroonilisele vormile ohustab patsiendi elu.

Hepatiidi sordid

Hepatiitil on mitu liiki: A, B, C, D, E, F, G, neid nimetatakse ka viiruslikuks hepatiiteks, sest nende esinemise põhjus on viirus.

Seda tüüpi hepatiidi nimetatakse ka Botkin'i tõveks. Selle inkubatsiooniperiood kestab 7 päeva kuni 2 kuud. Selle patogeeni, RNA-viiruse, võib edastada haige isik tervislikule isikule madalkvaliteediliste toodete ja vee abil, kokkupuutel patsiendi kasutatavate leibkonna esemetega. Hepatiit A on võimalik kolmes vormis, jagatakse need vastavalt haiguse ilmingute tugevusele:

  • äge kollatõbi korral on maks tõsiselt kahjustatud,
  • alatoonusega ilma kollatõbeeta, võime rääkida haiguse kergemast versioonist,
  • Subkliinilistes vormides võib sümptomeid isegi mitte märgata, kuigi nakatunud inimene on viiruse allikas ja suudab teisi nakatada.

Seda haigust nimetatakse ka seerumi hepatiidi raviks. Koos maksa ja põrna suurenemisega, valu ilmnemisega liigestes, oksendamine, temperatuur, maksakahjustus. See esineb kas ägedate või krooniliste vormide korral, mida määrab patsiendi immuunsuse seisund. Infektsiooni viisid: sanitaarreeglite, seksuaalvahekorra ajal, vereülekande ajal, halvasti desinfitseeritud meditsiinivahendite kasutamise ajal süstides. Inkubatsiooniperioodi kestus on 50 ÷ 180 päeva. B-hepatiidi esinemissagedus väheneb vaktsineerimisega.

Seda tüüpi haigus on üks kõige tõsisemaid haigusi, kuna sageli kaasneb tsirroos või maksavähk, mis viib hiljem surma. Haigus on halvasti ravitav ja lisaks sellele võib C-hepatiidi üks kord olla, võib isikule sama haigus uuesti infitseerida. HCV ei ole kerge puhastada: pärast ägeda C-hepatiidi haiguse taastumist on 20% patsientidest taastunud ja 70% -l patsientidest ei suuda organism organismil viirust ise ravida ja haigus muutub krooniliseks. Selle põhjuse väljaselgitamiseks, milleks mõned on ise ravitud, kuid teised ei ole, ei ole veel õnnestunud. C-hepatiidi krooniline vorm ei kao endiselt ja seetõttu tuleb seda ravida. HCV ägeda vormi diagnoosimist ja ravi teostab nakkushaiguste spetsialist, haiguse krooniline vorm on hepatoloog või gastroenteroloog. Nakatunud doonori kaudu võib nakatuda plasma või vereülekande ajal, kasutades halva kvaliteediga meditsiinivahendeid, seksuaalselt ja haige ema edastab infektsiooni lapsele. C-hepatiidi viirus (HCV) levib kiiresti kogu maailmas, patsientide arv on juba pikka aega ületanud poolsada miljonit inimest. Varem ei reageerinud HCV ravile hästi, kuid nüüd saab haigust ravida tänapäevaste otsese toimega viirusevastaste ravimitega. Ainult see ravi on üsna kallis ja seetõttu ei saa igaüks seda endale lubada.

Seda tüüpi hepatiit D on võimalik ainult siis, kui see on kaasuva B-hepatiidi viirusega (kaasinfektsioon on üksikute rakkude nakatumine eri tüüpi viirustega). Sellega kaasneb tohutu maksakahjustus ja haiguse ägenemine. Infektsiooni viisid - haiguse viiruse saamine viiruse kandja või haige inimese terve inimese verd. Inkubatsiooniperiood kestab 20 ÷ 50 päeva. Väliselt on haiguse käes sarnane B-hepatiit, kuid selle kuju on raskem. Võib muutuda krooniliseks, läheme hiljem tsirroosile. On võimalik läbi viia vaktsineerimine, mis on sarnane B-hepatiidi kasutamisega.

A-hepatiidi alane meenutamine läbib loomulikult ja mehhanismi, kuna see edastatakse ka verd samamoodi. Selle funktsiooniks on välkkiirsete vormide esinemine, mis põhjustab surma kuni 10 päeva jooksul. Teistel juhtudel saab seda efektiivselt ravida ja ennustatav ennustusprotsess on sageli soodne. Erandiks võib olla rasedus, kuna lapse kaotamise oht on 100%.

Sellist tüüpi hepatiidi pole piisavalt uuritud. On teada ainult, et haigus on tingitud kahest erinevast viirusest: üks neist eraldati doonorite verest, teine ​​leiti patsiendi väljaheites, kes sai pärast vereülekannet hepatiiti. Sümptomid: kollatõbi, palavik, astsiit (vedeliku kogunemine kõhuõõnde), suurenenud maks ja põrn, tasemete kasv bilirubiini ja maksaensüümide, esinemise muutused uriini ja rooja, samuti üldist mürgistuse. Hepatiidi F tõhusad meetodid ei ole veel välja töötatud.

Seda tüüpi hepatiit on sarnane C-hepatiidiga, kuid mitte nii ohtlik, kuna see ei soodusta tsirroosi ja maksavähki. Tsirroos võib esineda ainult hepatiit G ja C kaasinfektsiooni korral.

Diagnostika

Nende sümptomite korral on viiruslik hepatiit sarnane üksteisele, nagu ka mõned teised viirusnakkused. Sel põhjusel on patsiendi täpse diagnoosi kindlakstegemine keeruline. Selleks, et selgitada välja hepatiidi liik ja ravi nõuetekohane väljakirjutamine, on vaja laboratoorseid vereanalüüse, et identifitseerida markerid - näitajaid, mis on iga viiruse tüübi jaoks individuaalsed. Olles tuvastanud selliste markerite olemasolu ja nende suhte, on võimalik kindlaks teha haiguse staadium, selle aktiivsus ja võimalik tulemus. Protsessi dünaamika jälgimiseks korratakse uuringut pärast aja möödumist.

Kuidas ravida C-hepatiidi

Praegune raviskeeme kroonilise HCV redutseerida Ühendatud viirusevastase ravi sealhulgas antivirusniki otsetoimiva tüüpi sofosbuvir, velpatasvira, daklatasvira, ledipasvira erinevates kombinatsioonides. Mõnikord lisatakse ribaviriini ja interferoone, et suurendada nende efektiivsust. See toimeainete kombinatsioon peatab viiruste replikatsiooni, säästes maksa nende destruktiivsetest mõjudest. Sellel ravikul on mitu puudust:

  1. B-hepatiidi viiruse vastu võitlemise ravimite maksumus on kõrge, mitte kõik ei saa neid saada.
  2. Individuaalsete ravimite vastuvõtmisega kaasnevad ebameeldivad kõrvaltoimed, sealhulgas palavik, iiveldus, kõhulahtisus.

Krooniliste hepatiidi vormide ravi kestus kestab mitu kuud aastani, olenevalt viiruse genotüübist, kehas ja kasutatud ravimite kahjustusest. Kuna C-hepatiit mõjutab peamiselt maksa, peavad patsiendid järgima ranget dieeti.

HCV genotüüpide omadused

C-hepatiit on üks kõige ohtlikumatest viirushaigustest. Haigus on põhjustatud RNA-d sisaldavast viirusest, mida nimetatakse Flaviviridaeks. C-hepatiidi viirust nimetatakse ka "helluks tapjaks". Ta sai niisuguse ebameeldiva epiteemi, sest algfaasis haigusele ei kaasnenud ühtegi sümptomit. Klassikalise kollatõve tunnuseid ei esine ja valulõiget piirkonnas ei esine. Viiruse olemasolu tuvastamine ei saa varem kui paar kuud pärast nakatumist. Enne seda on immuunsüsteemi reaktsioon täielikult puudulik ja markerid veres ei ole võimalik tuvastada ning seetõttu ei ole genotüpiseerimist võimalik läbi viia. HCV eripära on ka asjaolu, et pärast seda, kui ta siseneb vereringesse reproduktsiooniprotsessi ajal, hakkab viirus kiiresti muteeruma. Sellised mutatsioonid häirivad nakatunud immuunsüsteemi, et seda haigust kohandada ja võidelda. Selle tulemusena võib haigus kesta mitu aastat ilma igasuguste sümptomiteta, mistõttu tsirroos või pahaloomuline tuumor ilmneb peaaegu ilma viiluta. Ja 85% juhtudest muutub ägeda vormi haigus krooniliseks. Hepatiit C viirusel on oluline tunnus - mitmesugune geneetiline struktuur. Tegelikult on C-hepatiit viiruste kogum, mis on klassifitseeritud vastavalt nende struktuuri variantidele ja mis on jagatud genotüüpideks ja alatüüpideks. Genotüüp on pärilike tunnuste kodeerivate geenide summa. Siiani on ravimitena teadaolevalt C-hepatiidi viiruse genotüübid, millel on oma alatüübid. Genotüüp on tähistatud numbritega 1 kuni 11 (kuigi kliinilistes uuringutes kasutatakse peamiselt genotüüpe 1 ÷ 6) ja alatüüpe, kasutades ladina tähestiku tähte:

Erinevates riikides levivad HCV genotüübid erinevalt, näiteks Venemaal, kõige sagedamini esimestest kolmandikest. Haiguse raskusaste sõltub genotüübi liigist, nad määravad raviskeemi, selle kestuse ja ravi tulemuse.

Kuidas HCV tüved levivad kogu planeedil

Maakera territooriumil levivad C-hepatiidi genotüübid heterogeenselt ja enamasti on leitud genotüübid 1, 2, 3 ja üksikute piirkondade jaoks on see välja järgmine:

  • Lääne-Euroopas ja selle idaosas on genotüübid 1 ja 2 kõige levinumad.
  • USA-s, alatüübid 1a ja 1b,
  • Põhja-Aafrikas on kõige levinum genotüüp 4.

Võimaliku HCV-infektsiooni ohu all on inimesed, kellel on verehäired (hematopoeetilise süsteemi kasvajad, hemofiilia jne), samuti patsiendid, kes läbivad dialüüsiüksustes ravi. Genotüüp 1 peetakse kõige levinumaks maailmas, see on tingitud

50% juhtumite koguarvust. Teine kõige sagedasem on genotüüp 3, mille pisut ületab 30%. HCV levik Venemaal on oluliselt erinev maailma või Euroopa versioonidest:

  • genotüüp 1b moodustab

50% juhtudest

  • genotüübile 3a

    20%

  • hepatiit 1a nakatunud

    10% patsientidest

  • hepatiit genotüübiga 2 leidub

    Kuid mitte ainult HCV-ravi raskus sõltub genotüübist. Ravi efektiivsust mõjutavad ka järgmised tegurid:

    • patsiendi vanus. Ravi võimalus on noortele palju suurem
    • naisi on lihtsam taastuda kui mehi
    • maksakahjustuse määr on oluline - soodsa tulemuse korral on vähem kahju,
    • viiruse koormuse suurus - mida väiksem on viiruse kehas ravi ajal, seda efektiivsem ravi,
    • patsiendi kaal: seda kõrgem, seda keerukam on ravi.

    Seetõttu viib raviarst välja raviskeemi, mis põhineb ülalkirjeldatud teguritel, genotüpiseerimisel ja EASL-i (Euroopa maksahaiguste liit) soovitustel. EASL hoiab pidevalt oma soovitusi ajakohasena ja, kui ilmnevad uued tõhusad ravimid C-hepatiidi raviks, korrigeerige soovitatud raviskeeme.

    Kes on HCV-nakkuse ohus?

    Nagu on teada, edastatakse C-hepatiidi viirus läbi vereringe ja seetõttu on see kõige tõenäolisem nakatunud:

    • transfusiooniga patsientidel
    • patsiendid ja kliendid hambaravis ja meditsiiniasutustes, kus meditsiinilised vahendid on steriliseeritud valesti,
    • Mittesteriilsete vahendite tõttu võib küünte ja ilusalongide külastamine ohtlik olla,
    • Sõrmuste ja tätoveeringute armastajad võivad ka kannatada halvasti ravitud vahendeid,
    • on suur nakkusoht neile, kes narkootikume tarvitavad mittesteriilsete nõelte korduva kasutamise tõttu,
    • lootele võib nakatuda hepatiit C-ga nakatunud ema,
    • seksuaalvahekorra ajal võib infektsioon siseneda ka terve inimese kehasse.

    Mis on C-hepatiidi ravi?

    Sel põhjusel peeti C-hepatiidi viiruseks pehmet tapjõulist viirust. See on võimeline aastaid mitte näitama, pärast seda ilmneb äkki tüsistuste kujul koos tsirroosiga või maksavähiga. Lõppude lõpuks on rohkem kui 177 miljonit inimest maailmas diagnoositud HCV-d. Raviks, mida kasutati kuni 2013. aastani, kombineeriti inetferferooni ja ribaviriini süstid, andis patsiendile paranemise võimalus, mis ei ületa 40-50%. Lisaks sellele kaasnesid sellega ka tõsised ja valulikud kõrvaltoimed. Olukord muutus 2013. aasta suvel pärast seda, kui USA farmaatsiaettevõte Gilead Sciences patentis ainet soofosbuviiri, mis toodeti ravimina kaubamärgi all Sovaldi, mis sisaldas 400 mg ravimit. HCV vastu võitlemiseks on see esimene otsene viirusevastane ravim (DAA). Sofosbuviiri kliiniliste uuringute tulemused olid rahuldavad arstid, kellel oli tulemuslikkus, mis sõltuvalt genotüübist oli 85... 95%, samal ajal kui ravi kestus võrreldes interferoonide ja ribaviriiniga oli enam kui kahekordistunud. Ja kuigi farmaatsiaettevõte Gilead patentis sofosbuviiri, sünteesiti seda 2007. aastal Michael Sofia, Pharmasetti töötaja, hiljem Gilead Sciences. Miikaeli nime all kutsus teda sünteesitud ainet sofosbuviriks. Michael Sophia ise koos kliiniliste meditsiiniliste uuringute Laser-DeBakey auhinna saanud koos teadlaste rühmaga, kes tegid mitmeid avastusi, mis näitasid HCV iseloomu, mis võimaldas tal raviks tõhusat ravimit luua. Noh, peaaegu kõik efektiivse uue toote müügist saadud kasumid läksid Gileadile, millega määrati Sovaldi jaoks monopoolselt kõrged hinnad. Lisaks kaitses ettevõte oma arengut spetsiaalse patendiga, mille kohaselt Gilead ja mõned tema partnerettevõtted said algsete DAA-de tootmise ainuõiguse omanikud. Selle tulemusena kattis ravimi müügi esimese kahe aasta jooksul Gileadi kasum korrapäraselt kõik kulud, mis ettevõtjal tekkisid Pharmasetti omandamisel, patendi saamise ja järgnevate kliiniliste uuringute saamisel.

    Mis on sofosbuviir?

    Selle ravimi efektiivsus HCV-vastases võitluses oli nii kõrge, et peaaegu mitte mingit ravirežiimi ei saa selle kasutamisel ära kasutada. Sofosbuvir'i ei soovitata kasutada monoteraapiana, kuid kombinatsioonis kasutamisel näitab see erakordselt häid tulemusi. Algselt manustati ravimit kombinatsioonis ribaviriiniga ja interferooniga, mis võimaldas lihtsatel juhtudel ravivastust saavutada vaid 29 nädala jooksul. Vaatamata asjaolule, et ainult interferoon ja ribaviriiniravi oli kaks korda vähem efektiivne ja kestus mõnikord ületas 40 nädalat. Pärast 2013. aastat tõi iga järgmine aasta teada, et üha rohkem uusi ravimeid, mis edukalt võitlevad hepatiit C viirusega, esineb:

    • 2014. aastal ilmus Daclatasvir
    • 2015 oli Ledipasviri sünniaasta,
    • 2016 rõõmus velpatasviri loomist.

    Bristol-Myersi Squibb vabastab Daclatasvir'i ravimi Daklinza, mis sisaldab 60 mg toimeainet. Gileadi teadlased loonud järgmised kaks ainet ja kuna ükski neist ei olnud monoteraapia jaoks sobiv, kasutasid nad ravimeid ainult kombinatsioonis sofosbuviiriga. Ravi hõlbustamiseks vabastatakse ettevaatlikult uuesti loodud ravimid kohe kombinatsioonis sofosbuviiriga. Nii olid narkootikumid:

    • Harvoni, milles kombineeritakse sofosbuviir 400 mg ja ledipasvir 90 mg,
    • Epclusa, mis sisaldas 400 mg sofosbuviiri ja 100 mg velpatasvirit.

    Daklatsavi ravimisel võeti kaks erinevat ravimit, Sovaldi ja Daclins. Kõiki aktiivsete koostisainete seostatud kombinatsioone kasutati teatavate HCV genotüüpide ravimiseks vastavalt EASL soovitatud raviskeemidele. Ja ainult sofosbuviri kombinatsioon velpatasviriga osutus pangenotüübilisteks (universaalseteks) vahenditeks. Epclus heastas kõik hepatiit C genotüübid, mille praktiliselt sama kõrge efektiivsus oli ligikaudu 97-100%.

    Geneeriliste ravimite tekkimine

    Kliinilised uuringud kinnitasid ravi efektiivsust, kuid kõigil neil väga tõhusatel ravimitel oli üks suur puudus - liiga kõrged hinnad, mis ei võimaldanud neil omandada suuremat osa haigetelt. Gileadi paigaldatud toodete monopoolselt kõrged hinnad põhjustasid pahameelt ja skandaalid, sundides patendiomanikke tegema teatud soodustusi, andes mõnele India, Egiptuse ja Pakistani äriühingule litsentsid selliste tõhusate ja soovitud ravimite analoogide (geneeriliste ravimite) valmistamiseks. Veelgi enam, võitlus patendiomanike vastu, pakkudes ravimeid, mis on ette nähtud mitteobjektiivselt pumbatud hindade raviks, tõi India kui riigi, kus miljonid C-hepatiidi põdevad patsiendid elavad kroonilises vormis. Selle võitluse tulemusena väljastas Gilead litsentside ja patendiarenduste 11 India ettevõtetele esmakordselt sofosbuviiri vabastamiseks ja seejärel nende muude uute toodete jaoks. Pärast litsentside saamist hakkasid India tootjad kiiresti tootma geneerilisi ravimeid, omistades oma kaubamärgid valmistatud ravimitele. Nii ilmus esmalt üldine Sovaldi, siis Daklinza, Harvoni, Epclusa ja India sai oma tootmises maailma liider. Litsentsilepingu kohaselt maksavad India tootjad 7% oma kasumist patendiomanike kasuks. Kuid isegi nende maksetega oli Indias toodetud geneeriliste ravimite maksumus kümme korda väiksem kui originaalide puhul.

    Tegevusmehhanismid

    Nagu varem teatatud, on tekkivate HCV raviskeemid seotud DAA-dega ja toimivad otseselt viirusega. Kuigi varem Interferoonravi kasutamine ribaviriiniga tugevdas, tugevdas see inimese immuunsüsteemi, mis aitas organismil haiguse vastu seista. Iga aine mõjutab viirust omal moel:

    1. Sofosbuvir blokeerib RNA polümeraasi, inhibeerides seeläbi viiruse replikatsiooni.
    1. Daclatasvir, ledipasvir ja velpatasvir on NS5A inhibiitorid, mis takistavad viiruste levikut ja nende tungimist tervetele rakkudele.

    Selline suunav toime võimaldab teil edukalt võidelda HCV-ga, kasutades sofosbuviiri kombinatsioonis suklatsavi, ledipasviiri, velpatasviriga ravi saamiseks. Mõnikord suurendab viiruse mõju kolmandale komponendile paar, enamasti ribaviriin.

    Generaarsed tootjad Indiast

    Riigi farmaatsiaettevõtted on kasutanud neile antud litsentse ja nüüd vabastab India järgmised Sovaldi geneerilised ravimid:

    • Hepcvir - tootja Cipla Ltd.,
    • Heptsinat - Natco Pharma Ltd.,
    • Cimivir - Biocon OÜ # 038, Hetero Drugs Ltd.,
    • MyHep on tootja Mylan Pharmaceuticals Private Ltd.
    • SoviHep - SIA Zydus Heptiza,
    • Sofovir on Hetero Drugs Ltd. tootja,
    • Resof - toodetud dr Reddy # 8217, s Laboratories,
    • Virso - vabastab Strid Arcolab.

    Daklini analooge toodetakse ka Indias:

    • Natdac poolt Natco Pharma,
    • Dacihep alates Zydus Heptizast
    • Daclahep alates Hetero Drugs
    • Dactovin alates Strolid Arcolab
    • Daclawin Biocon ltd. # 038, Hetero Drugs Ltd.,
    • Mydacla firmast Mylan Pharmaceuticals.

    Gileadi järel õpetasid India uimastitootjad Harvoni tootmist, mille tulemuseks olid järgmised geneerilised ravimid:

    • Ledifos - Hetero Releases
    • Hepcinat LP - Natco,
    • Myhep LVIR - Mylan,
    • Hepcvir L - Cipla Ltd.
    • Cimivir L - Biocon OÜ # 038, Hetero Drugs Ltd.,
    • LediHep - Zydus.

    Ja 2017. aastal õnnestus järgmiste India geneeriliste ravimite Epclusi tootmine:

    • Velpanat on välja andnud Natco Pharma,
    • Velasof on õppinud Hetero Narkootikume
    • SoviHep V hakkas tootma firma Zydus Heptiza.

    Nagu näete, on India farmaatsiaettevõtted Ameerika tootjatest mahajäänud ja uued ravimid piisavalt kiiresti omandanud, austades samal ajal kõiki kvalitatiivseid, kvantitatiivseid ja terapeutilisi omadusi. Välistades originaalide suhtes farmakokineetilise bioekvivalentsuse.

    Üldnõuded

    Geneeriline ravim on ravim, mis suudab asendada ravi kallimate originaalravimitega patendiga oma põhiliste farmakoloogiliste omaduste poolest. Neid saab vabastada nii siis kui need on kättesaadavad ja kui puudub litsents, siis ainult selle olemasolu tõttu laseb analoog väljastada. Juhul kui India ravimifirmad litsentse andsid, andis Gilead neile ka tootmistehnoloogia, andes litsentsisaajatele õiguse sõltumatutele hinnapoliitikatele. Selleks, et ravimi analoogi peetakse geneeriliseks, peab see vastama mitmele parameetrile:

    1. Peate järgima kvalitatiivsete ja kvantitatiivsete standardite ettevalmistamisel kõige olulisemate ravimkomponentide suhet.
    1. Järgige asjakohaseid rahvusvahelisi standardeid.
    1. Kohustuslik nõuetekohane tootmistingimuste järgimine on vajalik.
    1. Ettevalmistustes tuleks säilitada sobivad samaväärsed absorptsiooniparameetrid.

    Tuleb märkida, et WHO valvab ravimite kättesaadavuse tagamist, mille eesmärgiks on eelarveliste geneeriliste ravimite abil asendada kallite kaubamärkidega ravimid.

    Egiptuse Soferbuvir Generics

    Erinevalt Indiast ei saanud Egiptuse farmaatsiaettevõtted C-hepatiidi geneeriliste ravimite tootmisel maailma juhtivateks, kuigi nad omandasid ka analoogide sofosbuviri tootmise. Kuid suurem osa nende analoogidest on litsentseerimata:

    • MPI Viropack toodab ravimit Marcyrl Pharmaceutical Industries # 8229, üks esimesi Egiptuse geneerilisi ravimeid
    • Heterosofiir, vabastanud Pharmed Healthcare. See on ainus litsentseeritud üldnimi Egiptuses. Pakendis on hologrammi all peidetud kood, mis võimaldab kontrollida valmistaja originaalsust tootja veebisaidil, välistades selle võltsimise,
    • Grateziano, tootja Pharco Pharmaceuticals,
    • Sofolanork, toodetud Vimeo
    • ZetoPhari toodetud sofosüviir.

    Generics Hepatiidi vastu võitlemiseks Bangladeshist

    Bangladesh on veel üks riik, kes toodab suures koguses HCV-vastaseid ravimeid. Peale selle ei nõua riik isegi kaubamärgiga tähistatud narkootikumide analoogide tootmiseks litsentse, sest 2030. aastaks on ravimitootjal lubatud selliseid meditsiinilisi preparaate väljastada ilma asjakohaste litsentseerimisdokumentideta. Kõige kuulsamad ja varustatud uusima tehnoloogiaga on farmaatsiaettevõte Beacon Pharmaceuticals Ltd. Selle tootmisvõimsuse projekt loodi Euroopa ekspertide poolt ja vastab rahvusvahelistele standarditele. Beacon vabastab järgmised C-hepatiidi viiruse raviks kasutatavad ravimid:

    • Soforal - üldine sofosbuviir, sisaldab toimeainena 400 mg. Erinevalt tavapärastest pakenditest 28 pudeliga pudelites on Sophoral valmistatud ühe tabletiga, mis sisaldavad 8 tabletti,
    • Daclavir on üldine Daclatsavi viirus, üks ravimi tablett sisaldab 60 mg toimeainet. Seda toodetakse ka blistridena, kuid iga plaat sisaldab 10 tabletti,
    • Sofosvel on üldine Epclusa, sisaldab 400 mg sofosbuviiri ja 100 mg velpatasvirit. Pangenotüüpne (universaalne) ravim, mis on efektiivne HCV genotüüpide 1 ÷ 6 ravimiseks. Sellisel juhul ei ole pudelites tavalist pakendit, tabletid pakitakse 6 plaatidega blistritesse.
    • Darvoni on keeruline ravim, mis kombineerib sofosbuviiri 400 mg ja daklatsiiri 60 mg. Vajadusel kombineerige sofosbuviirravi koos daklatsaviiniga, kasutades teiste tootjate ravimeid, peate võtma iga tüüpi pillid. Ja Beacon pani need kokku ühe tabletiga. Darvoni pakendatakse ühe tabletiga 6 tabletti blisterpakendisse, mis saadetakse ainult ekspordiks.

    Beaconi preparaatide ostmisel, mis põhineb ravikuuril, tuleb arvestada nende pakendi originaalsusega, et osta raviks vajalikku kogust. Kõige kuulsamad India farmaatsiaettevõtted Nagu eespool mainitud, sai pärast riigi ravimiametite litsentse generaatorite vabastamiseks HCV-raviks, muutes India tootmiseks maailma juhtivaks. Kuid kõigi ettevõtete seas on väärib märkimist vähe, kelle tooted Venemaal on kõige kuulsamad.

    Natco Pharma Ltd.

    Kõige populaarsem on farmaatsiaettevõte Natco Pharma Ltd., kelle ravimid on päästnud mitme kümne tuhande kroonilise C-hepatiidi inimese elu. Natco Pharma ilmus 1981. aastal Hyderabadis algkapitaliga 3,3 miljonit ruupiat, seejärel oli töötajate arv 20 inimest. Nüüd Indias on neli Natco ettevõtet töötav 3,5 tuhat inimest ja teistes riikides asuvad filiaalid. Lisaks tootmisüksustele on ettevõttel hästi varustatud laboratooriumid, mis võimaldavad arendada kaasaegseid meditsiinilisi preparaate. Oma arengusuundadest on vähktõbe võitlemiseks väärib märkimist. Selles valdkonnas üks tuntumaid ravimeid on Veenat, mis on toodetud alates 2003. aastast ja mida kasutatakse leukeemia tarbeks. Jah, ja geneeriliste ravimite vabastamine C-hepatiidi viiruse raviks on Natco prioriteet.

    Hetero Narkootikumide Ltd

    Selle firma eesmärgiks on geneeriliste ravimite tootmine, mis allub sellele püüdlusele oma tööstuste võrgustikus, sealhulgas tehastes, millel on filiaalid ja kontorid laboritega. Hetero tootmisvõrk on teravdatud ravimite tootmiseks ettevõtte poolt antud litsentside alusel. Üks tema tegevustest on meditsiinilised preparaadid, mis võimaldavad võidelda tõsiste viiruslike haigustega, mille ravi paljudel patsientidel on originaalravimite kõrge hinna tõttu muutunud võimatuks. Omandatud litsents lubab Heterot viivitamatult jätkata geneeriliste ravimite vabastamist, mida seejärel müüakse patsientidele taskukohase hinnaga. Hetero-ravimite loomine pärineb 1993. aastast. Viimase 24 aasta jooksul on Indias ilmunud tosina tehast ja mitu tosinat tootmisüksust. Oma laborite olemasolu võimaldab ettevõttel viia läbi ainete sünteesi eksperimentaalset tööd, mis aitas kaasa tootmisbaasi laienemisele ja narkootikumide aktiivsele ekspordile välisriikidesse.

    Zydus heptiza

    Zydus on India ettevõte, kes on seadnud eesmärgiks luua tervislik ühiskond, mille omanike sõnul järgneb inimeste paranemise paranemine elukvaliteedi parandamiseks. Eesmärk on üllas ja selle saavutamiseks teeb ettevõte aktiivset harivat tegevust, mis mõjutab kõige vaesemaid elanikkonnarühmi. Kaasa arvatud elanikkonna tasuta vaktsineerimine B-hepatiidi vastu. Zidus on India farmaatsiatoodete turu tootmismahtude arv neljandal kohal. Lisaks oli 16 uimastite seast India farmaatsiatööstuse 300 tähtsaimat ravimit. Zyduse tooted on nõudlikud mitte ainult siseturul, vaid ka meie apteekides 43 riigis meie planeedil. Ja 7 ettevõtetes toodetud ravimite hulk üle 850 uimasti. Üks selle võimsamaid tööstusharusid on Gujarati riikides ja on üks suurimaid mitte ainult Indias, vaid ka Aasias.

    HCV Therapy 2017

    Iga patsiendi C-hepatiidi ravirežiimid valitakse arsti poolt individuaalselt. Kava õigeks, tõhusaks ja ohutuks valimiseks peab arst teadma:

    • viiruse genotüüp
    • haiguse kestus
    • maksakahjustuse määr,
    • tsirroosi olemasolu / puudumine, samaaegne infektsioon (näiteks HIV või muu hepatiit), eelmise ravi negatiivne kogemus.

    Pärast nende andmete saamist pärast analüüsi tsüklit valib arst optimaalse ravivõimaluse, mis põhineb EASLi soovitustel. EASL-i soovitusi korrigeeritakse igal aastal, lisavad need uued ravimid. Enne uute ravivõimaluste soovitamist esitatakse need kongressile või eriüritusele. Aastal 2017 vaatas EASL erikohtumine Pariisis soovitatud skeemide uuendused läbi. Otsustati täielikult katkestada interferoonravi Euroopas HCV raviks. Lisaks ei olnud ühtegi soovitatavat režiimi üheainsa otsese toimega ravimiga. Siin on mõned soovitatavad ravivõimalused. Kõik need on mõeldud ainult tutvumiseks ja ei saa olla tegevjuhiks, sest ainult arst võib anda ravi retsepti, mille järelevalvet teostab ta hiljem.

    1. Võimalikud raviskeemid, mille EASL on välja pakkunud C-hepatiidi monoinfektsiooni või HIV- + HCV-ga kaasneva nakkusega patsientidel, kellel ei ole tsirroosi ja kes ei ole varem ravitud:
    • genotüüpide 1a ja 1b ravimiseks võite kasutada:

    # 8229, sofosbuvir + ledipasvir, ilma ribaviriinita, kestus 29 nädalat, # 8229, sofosbuviir + daklatsavi, ka ribaviriinita, 29-nädalane raviperiood, # 8229 või sofosbuvir + velpatasvir ilma ribaviriinita, kestab kestus 29 nädalat.

    • Genotüübi 2 ravis kasutatakse 29-nädalase ilma ribaviriinita:

    # 8229, sofosbuvir + dklatasvir, # 8229 või sofosbuvir + velpatasvir.

    • genotüübi 3 ravis ilma ribaviriini kasutamiseta 29-nädalase raviperioodiga, kasutage:

    # 8229, sofosbuvir + daclatasvir, # 8229 või sofosbuvir + velpatasvir.

    • Genotüübi 4 ravimisel on võimalik ribotiiriini kasutada 29 nädala jooksul

    # 8229, sofosbuvir + ledipasvir, # 8229, sofosbuvir + daclatasvir, # 8229 või sofosbuvir + velpatasvir.

    1. Soovitatav EASL raviskeem C-hepatiidi monoinfektsiooni või samaaegse HIV / HCV infektsiooni korral kompenseeritud tsirroosiga patsientidel, keda ei ole varem ravitud:
    • genotüüpide 1a ja 1b ravimiseks võite kasutada:

    # 8229, sofosbuvir + ledipasvir ribaviriiniga, kestus 29 nädalat, # 8229 või 24 nädalat ribaviriini ilma # 8229 ja teine ​​võimalus - 24 nädalat ribaviriiniga, kellel on ebasoodne ravivastuse prognoos # 8229, sofosbuviir + daklatasvir, kui ribaviriini ei ole, siis 24 nädalat ja ribaviriini puhul on raviperiood 29 nädalat, # 8229 või sofosbuvir + velpatasvir ilma ribaviriinita, 29 nädalat.

    # 8229, sofosbuvir + dklatasvir ilma ribaviriinita kestab 29 nädalat ja ribaviriiniga, ebasoodsate prognoosidega - 24 nädalat, # 8229 või sofosbuvir + velpatasvir kombinatsioonis ribaviriiniga 29 nädala jooksul.

    8229, sofosbuviir + daklatsiiri 24 nädala jooksul koos ribaviriiniga, # 8229 või sofosbuviir + velpatasvir uuesti ribaviriiniga, raviperiood on 29 nädalat, # 8229, sofosbuvir + velpatasvir on võimalik 24 nädala jooksul, kuid ilma ribaviriinita.

    • Genotüübi 4 ravis kasutatakse samu raviskeeme nagu genotüüpides 1a ja 1b.

    Nagu näete, lisaks patsiendi seisundile ja tema keha omadustele mõjutab arsti valitud ravimite kombinatsioon ka ravi tulemust. Ravi kestus sõltub ka arsti poolt valitud kombinatsioonist.

    Ravi kaasaegsete HCV ravimitega

    Võtke ravimi tablette viivitamatult viirusevastast toimet, mida arst määrab suu kaudu üks kord päevas. Need ei ole jagatud osadeks, ei närida, vaid pestakse tavalise veega. Parim on seda teha samal ajal, kuna püsib aktiivsete ainete kontsentratsioon kehas. Toidutarbimise kuupäevadel ei ole vaja kinnitada, peamine eesmärk ei ole seda teha tühja kõhuga. Kui hakkate võtma ravimeid, pöörake tähelepanu oma heaolule, kuna selle aja jooksul on kõige lihtsam näha võimalikke kõrvaltoimeid. PPPP-l ise ei ole neid palju, samas kui kompleksis ettenähtud ravimid on palju väiksemad. Kõige sagedamini esinevad kõrvaltoimed järgmiselt:

    • peavalud
    • oksendamine ja pearinglus,
    • üldine nõrkus
    • isukaotus
    • liigesvalu,
    • muutused vere biokeemilistes parameetrites, väljendatuna hemoglobiinisisalduse vähesuses, trombotsüütide ja lümfotsüütide arvu vähenemine.

    Vähestel patsientidel on kõrvaltoimed võimalikud. Kuid kõigist teadaolevatest tervisekahjustustest hoolimata tuleb teatada ravivabale arstile vajalike meetmete võtmisega. Suurenenud kõrvaltoimete vältimiseks tuleks alkoholi ja nikotiini kasutamist välistada, kuna need mõjutavad maksa kahjulikku mõju.

    Vastunäidustused

    Mõnel juhul on DAA-de vastuvõtmine välistatud, see hõlmab järgmist:

    • patsientide individuaalne ülitundlikkus ravimite teatud koostisainete suhtes
    • Alla 18-aastased patsiendid, kuna puuduvad täpsed andmed nende toime kohta organismile,
    • loote ja rinnaga toitvaid lapsi kandvad naised,
    • naised peaksid ravi ajal kasutama usaldusväärseid rasestumisvastaseid vahendeid, et vältida imetamist. Lisaks kehtib see nõue ka naistele, kelle partnerid saavad ka DAA-ravi.

    Hoidke viivitamatult viirusevastaseid ravimeid lastele ligipääsmatud kohtades ja otsese päikesevalguse käes. Säilitustemperatuur peaks olema vahemikus 15 ÷ 30ºС. Alustage ravimite võtmist, kontrollige pakendil märgitud valmistamise ja ladustamise tähtaegu. Viivised on keelatud. Kuidas saada DAA-d Venemaa kodanikele Kahjuks ei saa India geneerilisi ravimeid Venemaa apteekides leida. Farmaatsiafirma Gilead, kes annab litsentse narkootikumide vabastamiseks, on ettevaatlikult keelanud nende ekspordi paljudesse riikidesse. Sealhulgas kõikides Euroopa riikides. Need, kes soovivad osta madala hinnaga India geneerilisi ravimeid, et võidelda C-hepatiidi vastu, võivad ära kasutada mitmel viisil:

    • tellige need läbi vene Interneti-apteekide ja saada kaup mõne tunni (või päeva jooksul) sõltuvalt kohaletoimetamise kohast. Enamikul juhtudel ei ole isegi ettemaks ette nähtud,
    • tellige need läbi India internetikaupluste, kus on kohaletoimetamine kodus. Siin on teil vaja ettemaksu välisvaluutas ja ooteaeg kestab kolm nädalat kuus. Lisaks on lisatud vajadus suhelda müüjaga inglise keeles,
    • mine Indiasse ja tuua ravim ise. See võtab ka aega, pluss keelebarjäär, lisaks ka apteegis ostetud kaupade originaalsuse kontrollimise keerukusele. Sellele lisandub isemajandusprobleem, mis nõuab termilist anumat, arsti arvamuse olemasolu ja retsepti inglise keeles, samuti kontrollikomplekti.

    Huvitatud uimastite ostmisel otsustavad inimesed ise, milliseid võimalikke tarnevalikuid valida. Lihtsalt ärge unustage, et HCV puhul sõltub ravimi soodsast tulemusest selle tekkimise kiirus. Käesolevas otseses mõttes on surmajärgne viivitus sarnane ja seetõttu ei tohiks te menetlust alustada.