Antiproliferatiivne toime on

Võimsus

Kui inimkeha tekib infektsioon, arenevad immuunreaktsioonid komplekssete rakuliste koostoimetega. Nende koostoimete reguleerijad on spetsiaalsed valgumolekulid - tsütokiinid. Praeguseks on uuritud enam kui 200 erinevat signaalimolekuli. Nende eripära on see, et neil ei ole mingit mõju välismaistele antigeenidele ja need on mõeldud üksnes teabe edastamiseks ühest rakust teise. Tsütokiinide osaluseta on normaalse immuunvastuse tekkimine võimatu. Üks olulisemaid tsütokiine on interferoon.

Interferooni on kolme tüüpi: interferoon-alfa (INF-α), interferoon-betta (INF-β), interferoon-gamma (INF-γ). Kõigil interferoonidel on viirusevastased, immunomoduleerivad, kasvajavastased ja antiproliferatiivsed toimed. Lisaks üldistele omadustele on interferoonidel mitmeid erinevusi.

INF-α ja INF-β on omavahel enam sarnased. Nende geenid paiknevad kromosoomil 9. Mõlemad indutseerivad signaalid on viirused. Neil on ilmne viirusevastane ja kasvajavastane toime, millel on palju vähemal määral immunomoduleerivaid omadusi. INF-α tootvate peamised rakud on INF-β-epiteelirakkude, fibroblastide makrofaagid.

IFN-γ on väljendunud immuunmoduleerivad tegevus koos interleukiin-2 (IL-2) ja tuumori nekroosi faktori (TNF või TNF) viitab see tähtsaimale põletikueelsete tsütokiinide, indutseerija rakulise immuunsuse. Viirusevastased ja kasvajavastased omadused on vähem INF-a ja INF-β omadused. Geen INF-γ asub kromosoomis 12, peamisteks rakkudeks on T-lümfotsüüdid, looduslikud või looduslikud tapjarakud (NK-rakud). Tootmise induktiivsignaaliks võib olla mis tahes antigeen või teised tsütokiinid.

Interferoonide viirusevastane toime on pärssida viirusliku RNA sünteesi, pärssides viiruse ümbrise valkude sünteesi. Selle toime mehhanismiks on rakusisese ensüümi aktivatsioon, näiteks proteiinkinaas või adenülaadi süntetaas. Proteiinkinaas hävitab valgusünteesi initsieerimisteguri messenger-RNA-ga, mis inhibeerib valkude sünteesi. Adenülaadi süntetaas - põhjustab viirusliku RNA-d hävitavate ainete sünteesi.

Interferoonide immunomoduleeriv toime on võime reguleerida immuunvastuses osalevate rakkude koostoimet. Interferoonid täidavad seda funktsiooni, reguleerides rakkude tundlikkust tsütokiinidele ja tüüp I peamise histoloogilise kokkusobivuse kompleksi (GCG1) molekulide ekspressiooni rakumembraanides. GKG1 suurenenud ekspressioon viirusinfektsiooniga rakkudes suurendab märkimisväärselt tõenäosust, et need tuvastatakse immunokompetentsete rakkude ja organismi elelenirovany poolt. Ilmekaimaks immunomoduleerivad omadused on IFN-γ, olles produkti T-lümfotsüüdi abistaja I kirjuta see koos teiste tsütokiini aktiveerida makrofaage, T-tsütotoksiliste lümfotsüütide, loomulikud tapjarakud (NK-rakud), pärsivad B-lümfotsüüdid aktiveerib prostaglandiinide ja kortikosteroidide süsteemid. Kõik need tegurid suurendavad fagotsüütseid ja tsütotoksilisi reaktsioone põletikulise fookuse piirkonnas ja soodustavad nakkushaiguse efektiivset kõrvaldamist.

Interferoonide kasvajavastane toime on seotud nende võimega rakukultuuri kasvu aeglustada või inhibeerida ja aktiveerida immuunsüsteemi kasvajavastaseid mehhanisme. See interferooni omadus on avastatud juba ammu ja seda kasutatakse laialdaselt ravi eesmärgil. Kõik interferooni kasvajavastased mõjud jagunevad otseselt ja kaudselt. Otsesed on seotud võimega otseselt mõjutada kasvajarakke, nende kasvu ja diferentseerumist. Kaudselt seostatakse immunokompetentsete rakkude võimet tuvastada ja hävitada keha ebatüüpilisi rakke.

Interferooni otsene kasvajavastane toime:

  • RNA sünteesi pärssimine.
  • Valgusünteesi pärssimine.
  • Erinevate rakkude stimuleerimine küpsemisele.
  • Kasvaja rakumembraani antigeenide ja hormooni retseptorite ekspressiooni suurenemine.
  • Laeva moodustamise protsesside rikkumine.
  • Onkoviiruste neutraliseerimine.
  • Kasvaja kasvufaktorite supressioon.

Interferooni kaudne kasvajavastane toime:

  • Immuunsüsteemi rakkude aktiivsuse stimuleerimine (makrofaagid, NK-rakud, T-tsütotoksilised lümfotsüüdid).
  • Ekspressiooni suurendamine histoloogilise ühilduvuse klassi I molekulide rakkudel.

Interferoonide proliferatsioonivastane toime seisneb interferoonide võimes avaldada tsütostaatilisi omadusi - pärssida rakkude kasvu, pärssides RNA ja valgu sünteesi, samuti rakkude proliferatsiooni stimuleerivate kasvufaktorite inhibeerimist.

Glükokortikoidid (antiproliferatiivne toime)

Proliferatsioonivastaseks glükokortikoidide seostatakse vähene kontakt monotsüüdid põletikus ning pärsib põranda- jagades fobroblastidest nii hormoonid, samuti väheneb nende stimulatoorefekti histamiini, serotoniini Kiniinide mille tekkimist väheneb nimetatud steroidid.

Lisaks vähendavad glükokortikoidid mukopolüsahhariidide sünteesi ja seeläbi piiravad vee ja plasmavalkude seondumist kudedega, mis koos eksudaadiga on seotud reumaatilise põletiku fookusega. Selle tulemusena väheneb reumaatilise põletiku fibrinoidifaasi ja seejärel hüalinoosi turse ja mis kõige tähtsam.

Selle tulemusena on takistatud või oluliselt vähendada häireid struktuuri südame klappide, veresooned ja nii edasi. Kõige arendab hea efekti kui seda kasutatakse koos kortikosteroidide mittesteroidseid põletikuvastaseid ravimeid.

Glükokortikoide kasutatakse ka nende organismi puudujääkide kompenseerimiseks ja häirete funktsioonide reguleerimiseks.

Selleks, et parandada puudumine glükokortikoidi hormoonid kui kasutatakse primaarse neerupealiste puudulikkus (Addisoni tõbi, veritsev neerupealsete sepsise, sünni vigastus, hüpoksia), mida iseloomustab see puudulikkuse ja glüko ja mineralokortikoidid ning kesk- neerupealiste puudulikkus (Hüpopituitarismiga hüpotalamuse pärssimise süsteemi - hüpofüüsi - neerupealiste koore tõttu glükokortikoidide pikaajalise kasutamise tõttu), mida iseloomustab ainult glükokortikoide puudulikkus.

"Pediaatriline farmakoloogia", I.V. Markova

Kortikosteroidide väljakirjutamine igal teisel päeval võib vältida või vähendada hüpotalamuse - hüpofüüsi - ja neerupealiste süsteemi inhibeerimist ja mittespetsiifilist resistentsust infektsioonide vastu. J. Melby (1977) loetles näiteid, mille puhul võib enamikul patsientidel glükokortikoidi määrata ükskõik millisel päeval, samuti haigusi, mille puhul see on võimatu. Glükokortikoide saab kasutada järgmisel päeval järgnevate haiguste puhul: bronhiaalne...

Kortikosteroidide määramisel juhtudel, mis ei vaja erakorralist ravi, on soovitatav võtta arvesse neerupealise koore endogeensete hormoonide sekretsiooni päevast rütmi. Ravi alguses tuleb kõige rohkem (tavaliselt 2/3) annuseid ette anda hommikul, 7... 8 tundi, ülejäänud - pärastlõunal 13... 14 tundi. Kui jagatakse päevane annus kolmeks annuseks, manustatakse seda 7... 10...

Looduslikku mineraalkortikoidi - aldosterooni - toodetakse neerupealise koorega glomerulaartsoonis; Seda protsessi reguleerib angiotensiin II, mis moodustub reniini mõjul. Deoksükortikosteroonatsetaat (DOXA) ja DOX-trimetüülatsetaat kasutatakse ravimitena. Kasutamisnäited. Mineraalkortikoide kasutatakse soole toksoosiks koos infusioonraviga. Neid kasutatakse ka ägeda hüpotensiooni korral, mis on seotud naatriumi ja vee kaotamisega (kuid...

Näidustused glükokortikoidide suurte annuste pikaajaliseks manustamiseks. Neid kasutatakse mõne nädalaid või isegi kuid raviks autoimmuunne hemolüütiline aneemia, purpurtrombotsütopeenia, mõned nefriit, haavandiline koliit, sarkoidoos, äge leukeemia, üldistatud Hodgkini tõbi, mitte-reumaatiliste kardiit, mõnikord raske astma. Enamikul juhtudel sõltub terapeutiline efekt tsütolüüsi reaktsioonide, eriti allergilise tekke, supressioonist....

Anaboolsed steroidid: methandrostenolone (dianabol, Nerobolum) metilandrostendiol (methandriol) fenobolin (Durabolin, Nerobolum) retabolil - aine poolt tekitatud syn teesi meessuguhormoonide (androgeenide). Androgeenidel on kaks erinevat mõju: androgeenne (st sekundaarsete seksuaalomaduste arengu stimuleerimine) ja anaboolne. Anaboolsed steroidid erinevad struktuurilt androgeenidest ja nende androgeenseid omadusi on järsult vähendatud (100 korda või rohkem)....

Antiproliferatiivsed ravimid - ravimite ja ravimite nimekiri

Farmakoloogilise toime kirjeldus

Antiproliferatiivne toime on suunatud erinevate rakkude ülemäärase proliferatsiooni pärssimisele. Toimemehhanism on erinev ja sõltub konkreetsest ravimist ja rakkude tüübist, millele see toime on suunatud. Eriti võib selle toimemehhanismi seostada teatud onkogeenide sünteesi moduleeriva toimega, mis viib rakkude neoplastilise transformatsiooni normaliseerimisele ja tuumori kasvu pärssimisele. Või toimemehhanism võib põhineda fibroblasti proliferatsiooni inhibeerimisel, mida stimuleerib fibroblastide kasvu peamine tegur. Antiproliferatiivsete toimetega ravimid kasutatakse erinevate onkoloogiliste haiguste, eesnäärme adenoomide ja erinevate krooniliste nahahaiguste (näiteks psoriaasi) raviks ja ennetamiseks.

Uimastite otsing

Farmakoloogilise toimega preparaadid "Antiproliferatiivne"

  • A.
  • Avonex (lüofilisaat süstelahuse valmistamiseks)
  • Avonex (lahus intramuskulaarseks manustamiseks)
  • Adenostop (kontsentraat suukaudse lahuse valmistamiseks)
  • Alteviir (süstelahus)
  • Alfaferon (Süstelahus)
  • Arava (suukaudsed tabletid)
  • B
  • Beloderm (koor välispidiseks kasutamiseks)
  • Beloderm (salv välispidiseks kasutamiseks)
  • R
  • Genferon (rektaalsed ravimküünlad)
  • Genferon Light (spray nasal)
  • D
  • Dilatrend (suukaudsed tabletid)
  • L
  • Leflunomiid (pulberaine)
  • Leflunomiid (suukaudsed ravimvormid)
  • F
  • Permixon (kapsel)
  • R
  • Realdiron (lüofilisaat lahuse valmistamiseks nahaaluseks manustamiseks)
  • Ronbetal (lahus subkutaanseks manustamiseks)
  • T
  • Tadenan (kapsel)
  • Tükveool (õli suukaudseks manustamiseks)
  • Tükveol (rektaalsed ravimküünlad)
  • Tükveool (kapsel)

Tähelepanu! Selle ravimi juhendi teave on mõeldud meditsiinitöötajatele ja ei tohiks olla enesehoolduse aluseks. Uimastite kirjeldused on mõeldud tutvumiseks ja need ei ole ette nähtud ravi määramiseks ilma arsti osaluseta. On vastunäidustusi. Patsiendid vajavad ekspertarvamust!

Kui olete huvitatud muudest antiproliferatiivsetest ainetest ja valmististest, nende kirjeldustest ja kasutamisjuhistest, sünonüümidest ja analoogidest, teave vabanemise koostise ja vormi kohta, kasutamisjuhised ja kõrvaltoimed, kasutamismeetodid, annused ja vastunäidustused, laste ravimite märkused, vastsündinutele ja rasedatele naistele, ravimite hind ja ülevaated või teil on muid küsimusi ja soovitusi - kirjutage meile, me kindlasti proovime teid aidata.

antiproliferatiivne

Antiproliferatiivne toime on suunatud erinevate rakkude ülemäärase proliferatsiooni pärssimisele.

Toimemehhanism on erinev ja sõltub konkreetsest ravimist ja rakkude tüübist, millele see toime on suunatud. Eriti võib selle toimemehhanismi seostada teatud onkogeenide sünteesi moduleeriva toimega, mis viib rakkude neoplastilise transformatsiooni normaliseerimisele ja tuumori kasvu pärssimisele. Või toimemehhanism võib põhineda fibroblasti proliferatsiooni inhibeerimisel, mida stimuleerib fibroblastide kasvu peamine tegur.

Antiproliferatiivsete toimetega ravimid kasutatakse erinevate onkoloogiliste haiguste, eesnäärme adenoomide ja erinevate krooniliste nahahaiguste (näiteks psoriaasi) raviks ja ennetamiseks.

Antiproliferatiivne aine

Leiutis käsitleb farmaatsiatööstust, eriti loodusliku päritolu vahendeid, millel on antiproliferatiivne aktiivsus. Antiproliferatiivse toimega aineks on Toxocara canis'e valguekstrakt, mis saadakse helminti homogenaadi T. Canis fosfaat-soolalahuse puhverlahuse pH 7,2 ja suhtega 1:10 36-48 tundi temperatuuril 4 ° C tsentrifuugimisega ekstraheerimise teel. Eespool nimetatud tööriistal on ilmne antiproliferatiivne aktiivsus. 1 hj f-ly, 1 tab., 2 ex.

Leiutis käsitleb meditsiinilist ja veterinaarmeditsiini valdkonda, eriti uut looduslikku päritolu vahendit, millel on antiproliferatiivne toime.

Kaasaegne meditsiin on kasvajate kemoteraapias üsna ulatuslik ravimite arsenal. Enamikke kemoterapeutilisi aineid esindavad alküülivate antineoplastiliste ravimite rühmad, antimetaboliidid, kasvajavastased antibiootikumid, kasvajavastased hormonaalsed ravimid, immunomodulaatorid ja mõned erinevad toimemehhanismid. Enamik neist vähivastastest ravimitest on väga mürgine ning seetõttu valitakse kemoteraapia kava ja kestus, võttes arvesse kõrvaltoimete ilmnemist, mis mõjutab üldiselt ravi efektiivsust.

Tuntud taimset päritolu looduslikud kasvajavastased ravimid (Vinca roosiaalalkaloidid (vinblastiin, vinkristiin); jugapuu alkaloidid (taksaanid) (paklitakseel, dotsetakseel); )) ja bakteriaalse päritoluga (rubromütsiin ja teised), mille kasutamine on piiratud ka kõrge mürgisuse ja kitsa ravitoimega spektri (teatud tüüpi s kasvaja, soovitavalt koos exophytic kasvu).

Sellest tulenevalt on vaja uusi, väga tõhusaid vähivastaseid loodusliku päritoluga ravimeid, millel oleks lai valik toimet ja oleks vähem toksiline.

Helmintiid - tavaline nime parasiitide ussidesse, mis elavad inimestel, muudel loomadel ja taimedel, mis põhjustavad helmint-nakkusi.

Helmintide hulka kuuluvad paelusside esindajad või tsestodid, flukesid või trematodes (mõlemad rühmad kuuluvad flatworms) ja ümarussid või nematoodid.

Viimased hõlmavad toksokaarseid (eriti Toxocara canis). T. canis on lihasööjate, nagu näiteks koerte sooled, parasiitne nematood; invasiivne haigus, mida tuntakse toksokarioosina.

Parasitismi ajal toodavad helminte erinevad ainevahetusproduktid. Helmiinide sekretoorseid eralduvaid jäätmeid tekitavad peremeesorganismi füüsikalised protsessid ebaloomulikud ained.

On teada, et sissetungide patogeenid võivad moduleerivalt mõjutada paljude erinevate etioloogiaga haiguste, sealhulgas pahaloomuliste haiguste (näiteks Vasilev S. et al., 2015) kulgu. Eelkõige on teada, et trichinella spiraalis ( trihhinoosi paljunemine) põhjustab pahaloomuliste rakkude kasvu pärssimist ja suurendab loomade ellujäämist pärast B-16 melanoomirakkude in vivo inokuleerimist (Molinari JA, Ebersole JL, 1977; Pocock D., Meerovitch E., 1982; Kang YL et al., 2013 ) Samuti on kättesaadavad andmed T. spira ainevahetusproduktide kohta inhibeeriv toime kasvajarakkude kasvu ja ellujäämisele in vitro (Vasilev S. et al., 2015; Wang X. L. et al., 2009; Wang X. L. et al., 2013).

T. canis kasvajavastase toime või nende helmintide ainevahetusproduktide hindamiseks tehtud uuringuid ei ole varem läbi viidud.

Leiutise eesmärgiks on saada T. canis kudedest saadud valkude ekstrakte, hinnata nende proliferatsioonivastast toimet erinevate liinide kasvajarakkude mudelitele ja tagada nende võimalik kasutamine tulevikus efektiivseks kasvajavastaseks aineks.

Leiutise olemus seisneb selles, et antiproliferatiivse toimega aine on helminteede valguekstrakt, eriti Toxocara canis ekstrakt. Tuleb märkida, et helmint-homogenaadi, sh T. canis ekstrakti saamise tingimused sõltuvad kasutatavast bioloogilisest materjalist ja valkude ekstraktite saamise põhiomadused on ekstraheerimine fosfaat-soolalahuse puhvriga, mille pH = 7,2.

Ekstraktil on inimese kasvajarakkude mudeleid in vitro väljendunud antiproliferatiivne ja tsütostaatiline toime. Nagu eespool mainitud, pole toksokarjääri ekstrakt eelnevalt katsetatud inimese kasvajarakkude mudelites in vitro.

Kavandatud antiproliferatiivse aine looduslik päritolu võib olla väga toksiline suurte kasvajavastase efektiivsuse olemasolul laia toimespektriga.

Erijõudluse näited

Näide 1. Valguekstrakti T. canis valmistamine.

Võimalikult antiproliferatiivse toimega vahendina kasutatakse küpset T. canis valguekstrakti, mis on eelnevalt puhastatud madala molekulmassiga ühenditest.

Põhjalikult pesti destilleeritud veega ja seejärel füsioloogilisel lahusel värsked külmutatud seksuaalselt küpsed ussid - Toxocara canis allutati käärilisel peenestamisel, homogeniseerimisel portselan-uhmris, mis asetati jääga nõusse. Homogeniseerimise protsessis viidi saadud biomaterjal mitmeks külmutamiseks ja sulatamiseks (3-5 korda) samaaegseks jahvatamiseks, et toorme struktuuri täielikult hävitada homogeense homogeense massi saamiseks. T. canis saadava homogenaadina saadud valkude ekstrahenti kasutades kasutati fosfaatsooli puhverlahust, pH 7,2, mis valmistati vastavalt retseptile (naatriumkloriid, 8,5 g, diasendatud naatriumfosfaat, 1,15 g, monofosforhappe kaalium, 0, 2 g 1 1 destilleeritud vees) suhtega 1:10. Ekstraheerimine viidi läbi külmkapis temperatuuril + 4 ° C 48 tundi pidevalt segades magnetseguril. Pärast ekstraheerimise aega tsentrifuugiti saadud biomaterjali 20 000 minutit kiirusel 15 000 p / min Optima TLX külmutatult tsentrifuugiga (mikroprotsessori Becman Coulter Herneshal S.A. kontrollitud püstine tsentrifuug). Pärast tsentrifuugimist saadud T. canis'e valguekstrakt vabastati madala molekulmassiga valkudest dialüüsiga fosfaatsooli puhverlahuse suhtes, mis lahjendati destilleeritud veega vahekorras 1:10.

Saadud valguekstrakti säilitati temperatuuril -20 ° C. Kasutades polüakrüülamiidgeelelektroforeesi, tehti kindlaks, et T. canis'e valguekstrakt sisaldab enam kui 20 erineva elektroforeetilise liikuvuse ja molekulmassi valgufraktsioone.

Näide 2. T. canis valgu ekstrakti mõju inimese rinnavähi rakkude (MCF-7) ja inimese käärsoole (Caco-2) kultuuridele sõltuvalt ekstrakti kontsentratsioonist.

Selle katse eesmärk oli hinnata valgulise ekstrakti T. canis mõju kahe liini inimese kasvajarakkude proliferatsioonile.

Materjalid ja meetodid

Sihtrakud. Selles töös kasutati kahte epiteelirakuliini: MCF-7 (inimese rindade adenokartsinoom) ja Caco-2 (inimese käärsoole adenokartsinoom). Rakud väljaspool eksperimenti säilitati vedelas lämmastikus. Enne uuringute läbiviimist külmutati rakukultuuridega ampullid ja kultiveeriti standardmeetoditega kultuuri pudelites (CORNING, kolb, 25 cm2, USA) DMEM GlutaMAX kasvukeskkonnas (Gibco), lisades 10% FBS ja antibiootikumi / antimükootilise aine (Gibco, × 100) kõrge niiskuse tingimused2-inkubaator (New Brunswick, Galaxy 170R) temperatuuril T = 37 ° C 5% CO atmosfääris2.

Uuritud valguekstrakt. Uuritud valguekstrakt T. canis (valmistamiseks, vt näide 1) on ekstrakt fosfaatpuhverdatud soolalahuses, mitte steriilne. Valgu kontsentratsioon põhilahuses oli 10,9 mg / ml. Enne uuringut hoiti lahust temperatuuril -70 ° C.

Enne operatsiooni sulatati valguekstraktiga toru toatemperatuuril. In vitro katses kontrolliti valguekstrakti järgmiste valkude kontsentratsioonidega: 12,5, 25, 50, 100, 250, 500, 1 ja 2 mg / ml. Lahjenduste valmistamiseks kasutati DMEM GlutaMAX kasvukeskkonda (DGIBCO) 2% FBS ja antibiootikumiga.

Enne eksperimendi valmistati töölahuse kontsentratsiooniga 2 mg / ml, pärast steriliseerimist läbi Millipore kausta-düüsi (0,22 μ) valmistati ka ekstrakti lahjendust T. canis: 1, 500, 250, 100, 50, 25 ja 12,5 μg / ml, kasutades kasvukeskkonda DMEM GlutaMAX (DGIBCO) 2% FBS ja antibiootikumiga.

Katse jaoks inkubeeriti MCF-7 ja Caco-2 rakke vastavalt standardsele meetodile, et saada subkonfluentne monokiht. Aktiivses kasvufaasis hajutatakse rakkude monokiud trüpsiini / versaenilahusega, saadud rakud resuspendeeriti DMEM GlutaMAX kasvukeskkonnas (Gibco) 10% FBS-ga ja standardse kontsentratsiooniga antibiootikumiga. Värskelt valmistatud rakususpensiooni külvati 24-süvendiga plaatidel (SARSTEDT, Saksamaa) 35 × 10 3 rakku süvendi kohta MCF-7 rakkude jaoks ja Caco-2 rakkude kohta 30 × 10 3 rakku süvendi kohta. Seejärel paigutati plaadid CO-sse2-inkubaatorit 3 tundi, kuni rakud paisusid. Seejärel eemaldati süvenditest mitte-adherentsete rakkudega keskkond ja eksperimentaalsesse süvendisse lisati kasvukeskkonda aine testitavate kontsentratsioonidega (4 katsega iga testi kontsentratsiooni kohta). Kontrollina jäeti nelja süvendiga rakud, mis olid kultiveeritud täieliku kasvukeskkonnaga, milles oli 2% FBS ilma uuritava aineta. Kasvusöötme viimane maht kontroll- ja katserühmas 500 ui süvendi kohta.

Katse ajal viidi rakkude igapäevane valgus-optiline vaatlus läbi inverteeritud Olympus CK 40 mikroskoobi (Jaapan), hinnates eksperimentaalsetes süvendites rakumorfoloogiate muutusi või puudumist võrreldes kontrolliga. Kasvajarakkude proliferatiivset vastust T. canis uuritava ekstrakti toimel hinnati moodustunud monokihi tihedus ja elujõulisus pärast 96-tunnilist rakkude inkubeerimist uuritud ekstrakti manulusel.

Rakkude eluvõimelisus määrati standardse rakkude loendamise protseduuriga Goryaevi kambris, kusjuures rakutsuspensioon esialgselt värviti trüpaansinise lahusega. Sel eesmärgil hõõruti monokiht trüpsiini / versseeni lahusega, rakud resuspendeeriti kasvukeskkonda ja töödeldud rakususpensiooni värviti 0,4% Trypan Blue'i lahusega (SIGMA). Seejärel loendati rakud Goryaevi kambrisse. Selleks loendati igasse süvendisse rakkude koguarv (kokku) ja värvitud (mitteelujõuliste) rakkude arv.

Eluvõimelised rakud (Nhästi) arvutatud valemiga

kus nt - süvendi rakkude koguarv (kokku);

Numbes - värvitud (mitteelujõuliste) rakkude arv hästi.

T. canis uuritud ekstrakti mõju kasvajarakkude MCF-7 ja Caco-2 proliferatiivsele aktiivsusele hinnati 96 tunni pärast, võrreldi rakkude koguarvu eksperimentaalses süvendis võrreldes kontrolliga.

Katse käigus tulemuste hindamiseks test ekstrakti T. canis kontsentratsioonidel näidatud epiteeli kultuurid inimese rinnavähi rakud (MCF-7) ja inimese käärsoole (Caco-2) viidi läbi päevas visuaalse kontrolli üle, milline kasvu ja morfoloogia kasvav rakkude kolooniad. 24 ja 48 tunni järel kõikides MCF-7 ja Caco-2 rakkude katsekuludes on kolooniate tihedus võrreldav kontrolliga. Morfoloogilisi muutusi ei leitud. Detritus oli täiesti puudulik.

72 tunni pärast täheldati MCF-7 ja Caco-2 rakkudes märkimisväärset kasvu aeglust kontsentratsiooniga 2 mg / ml. Märgiti, et eksperimentaalsetes süvendites kontsentratsiooniga 2 mg / ml oli kolooniate suurus väiksem kui kontrollrühmas; Ka vaateväljas on mitootiliste jaotusrakkude arv märkimisväärselt vähenenud ja morfoloogilisi muutusi pole täheldatud. MCF-7 ja Caco-2 rakkude süvendites 1 ja 500 ug / ml täheldati võrreldes kontrolliga vähest kasvu aeglustumist. Eksperimentaalses süvendis kontsentratsiooniga 12,5, 25, 50 ja 250 ug / ml ei leitud kontrollrühma K suhtes erinevusi.

Pärast 96 tunni möödumist MCF-7 ja Caco-2 rakkude kasvatamisel kontsentratsioonidel 2, 1 ja 500 ug / ml täheldati vaatevälja märkimisväärselt vähem proliferatiivseid kolooniaid, võrreldes väiksema arvu rakkudega võrreldes kontrollrühma omadega. MCF-7 rakkudes täheldati morfoloogilisi muutusi ainult maksimaalse kontsentratsiooniga 2 mg / ml. Selles eksperimentaalses rühmas täheldati individuaalseid kolooniaid, kus täheldati rakke, millel ei olnud iseloomuliku mustri kadusid iseloomulike ja väljendunud kontuuridega. Vaateväljas mitootiliste jagavate rakkude arv väheneb. Sellisel juhul puudus keskkonda jääv puudus.

Pärast katse lõpetamist, 96 tunni möödumist, rakud trüpsiniseeriti, saadud rakususpensiooni värviti 0,4% trüpaansinise lahusega ja rakkude arv loendati Goryaevi kambrisse. Loendurrakkude tulemused on toodud tabelis 1.

Tabelist 1 toodud andmetest selgub, et uuritud T. canis'e ekstrakt ei mõjutanud pärast 96-tunnilist inkubeerimist märkimisväärset elujõuliste Caco-2 rakkude arvu. Seega oli kontsentratsioonidel 2, 1 ja 500 ug / ml inimese käärsoole elujõuliste rakkude arv 90,0, 88,5 ja 88%, mis on võrreldav rakkude kontrollrühmana, kusjuures eluvõimelisus on 96%. Samal ajal täheldati samade kontsentratsiooniväärtustega kontrollrühma suhtes märkimisväärset rakkude koguarvu vähenemist. Seega oli 96-tunnisel kultiveerimisel kontrollgrupi Caco-2 rakkude koguarv 116,7 x 10 3 rakku süvendi kohta ning 500, 1 ja 2 mg / ml oli 72,0 × 10 3, 63,3 × 10 3 ja 65,9 × 10 3 rakku / süvend. Ekstraktsioonide kontsentratsioonidel 12,5 kuni 250 ug / ml on rakkude koguarv võrreldav kontrollrühmaga ja on vahemikus 94,0 × 10 3 kuni 106,0 × 10 3 rakku süvendi kohta. Selle põhjal võib järeldada, et T. canis ekstrakti suur kontsentratsioon 500 kuni 2 mg / ml pärsib Caco-2 kasvajarakkude proliferatiivset aktiivsust.

Kui võrrelda saadud tulemusi (tabel 1) T. canis ekstrakti mõjuga inimese rinna ja inimese käärsoole kasvajarakkude kultuurile, võib eeldada, et MCF-7 rakud on uuritava aine negatiivse mõju suhtes tundlikumad. Seega tuleneb tabelis 1 esitatud andmetest, et elujõuliste MCF-7 rakkude arv väheneb järk-järgult 95,2% -ni minimaalse annusega 12,5 kuni 79,5%, maksimaalse väärtusega 2 mg / ml, võrreldes kontrollväärtusega 96,8 % Kerget pärssivat toimet test ekstrakti proliferatiivsele aktiivsust MCF-7 rakkudes ilmus juba kontsentratsioonil 50 ug / ml, kus rakkude koguarvust moodustas 151,9 x 10 märts rakku / süvendi, võrreldes võrdlusväärtusega 181,3 x 10 märts rakku / auk. Kontsentratsiooni suurenemisega 100 μg / ml ja kõrgemast ekstrakti inhibeeriv toime suurenes proportsionaalselt kontsentratsiooniga ja saavutas maksimaalse väärtuse 2 mg / ml, kus rakkude koguarv vähenes kontrolliga võrreldes kolm korda ja oli 60,0 x 10 3 rakku süvendi kohta.

Selle töö tulemuste põhjal võime järeldada järgmist.

1. T. canis uuritud ekstrakt avaldab MCF-7 rakkudele avalduvat antiproliferatiivset toimet kontsentratsioonidel 100, 250, 500, 1 ja 2 mg / ml, mis avaldub 96-tunnisel inkubatsioonil.

2. Ekstrakti mõju MCF-7 rakkudele on annusest sõltuv.

3. T. canis ekstrakti inhibeeriv toime Caco-2 rakkude kultiveerimise proliferatiivsele aktiivsusele avaldub vähemal määral ja 500, 1 ja 2 mg / ml suuremates kontsentratsioonides.

4. MCF-7 rakkude kultuur on pärast 96-tunnilist kultuuri tundlikkus T. canis ekstrakti antiproliferatiivse toime suhtes võrreldes Caco-2 rakkudega in vitro mudelis.

1. Kang Y.J., Jo Jo, Cho M.K. et al. B16-F10 melanoomirakkude Thrichinella spiraalis infektsioon // Vet. Parasitool. - 2013. - V. 196 (1-2). - P. 106-113.

2. Molinari, J.A., Ebersole, J.L. Pikaajalise trichinella spiraali nakkuse antineoplastilised mõjud B-16 melanoomile // Int. Ark. Allergia Appl. Immunol. - 1977. - V. 55 (1-4). Lk 444-448.

3. Pocock D., Meerovitch E. Trichinelioosi anti-neoplastiline toime süngeenselt hiiremudelil // Parasitoloogia. - 1982. - V. 84 (lk 3). - lk 463-473.

4. Vasilev S., Ilic N., Gruden-Movsesijan A. jt. Nekroos ja apoptoos Trichinella spiraalis vahendatud kasvaja vähenemises // Cent. Eur. J. Immunoloogia. - 2015. - V. 40 (1). - lk 42-53.

5. Wang X.L., Fu B.Q., Yang S.J. et al. Trichinella spiraalis potentsiaalne kasvajavastane aine // Vet. Parasitool. - 2009. - V. 159 (3-4). - lk 249-252.

6. Wang X.L., Liu M.Y., Sun S.M. et al. Trichinella spiraalis toodetud tuumorivastane valk indutseerib inimese hepatoomi H7402 rakkudes apoptoosi // Vet. Parasitool. - 2013. - V. 194 (2-4). - lk 186-188.

1. ainet, on proliferatsioonivastane toime, mis on valguekstraktist Toxocara ekstraheeritud gomogentata helmintide T. Canis fosfaatpuhverdatud soolalahuses pH 7,2 juures vahekorras 01:10 36-48 tundi temperatuuril 4 ° C, ja tsentrifuugimine.

2. Tööriist vastavalt nõudluspunktile 1, mida iseloomustab see, et sellel on inimese proliferatsioonivastane toime inimese kasvajarakkude mudelites in vitro.

Antiproliferatiivne toime on

Mõned funktsioonid põhinevad interferoonide proliferatiivsetel toimetel. Enamik interferooni infektsioonivastase aktiivsuse komponente mängivad rolli nende kasvajavastases efektis.

Tsiteeritud suurenenud sünteesi Mx-valgud, mis inhibeerivad mRNA transkriptsiooni ensüümid 2'-5'-oligoadenülaatsüntetaas süsteemi, pärssides tõlkimise sünteesiks vajalikud raku proteiinide, trüptofaan ammendumine rakusisestest, põhjustades häireid valgusünteesi rakus, on suure tähtsusega proliferatsioonivastases, sealhulgas kasvajavastane, interferooni toime.

Olulisuse nivoo muutub 2'-5 'süntetaasi proliferatsioonivastast toimet IFN-valideeritud kliinilised vaatlused: näitab korrelatsiooni aste suurenevate tase ensüümiravi on efektiivne patsientidel soole kartsinoidsed ja lümfoomid.

Interferooni antiproliferatiivse toime ei ole vähem tähtis teine ​​mehhanism. Interferooni sidumine interferooni retseptoriga rakutallile edastatud signaal vähendab rakukultuuri reguleerimisel osalevate proto-onkogeenide, eriti c-tus ja c-fos ekspressiooni.

Nende proto-onkogeenide aktiivsuse pärssimine viib rakutsükli blokeerimiseni, rakkude akumuleerumiseni G0 faasis, nii et proliferatsioon aeglustub või isegi peatub, kuna enamik rakke läbivad apoptoosi. See protsess on pöörduv ja mõni aeg pärast interferooni eemaldamist võib rakkude proliferatsioon taastuda sama kiirusega, samal ajal kui interferooni manulusel supresseeritud onkogeenide ekspressioon võib pärast selle eemaldamist ka kehast taastuda samal tasemel.

Samamoodi ei põhjusta interferoonide mõju enamikul juhtudel rakkudesse pöördumatuid protsesse, mille genotüüp muutub viiruse genoomi integreerumise mõjul rakkude DNA-sse. Nendel juhtudel võib interferooni prolongeeritud kasutamine taastada normaalse raku fenotüübi, kuid interferooni toime lõppemine viib uuesti kasvaja tekkimiseni.

Angiogeneesi, vaskulaarse kasvu ja neoplasmi, mis mängib kasvaja kasvu ja metastaasi olulist rolli, pärssimine on interferoonide antiproliferatiivne, eriti kasvajavastane toime oluline. Arvukad uuringud uurides terapeutilise toimemehhanism IFN-a temperatuuril hemangiomatoos näitas, et interferoonid inhibeerivad endoteelirakkude proliferatsiooni ja silelihasrakkude, pärsivad fibroblastide kasvufaktor ja angiogeniin (kasvufaktor ja veresoonte kasvajad), vähendada kollageeni tootmiseks.

Näidati, et IL-12, millel on tugev anantiogeenne toime, suurendab IFN-y ja selle efektor-valgu p10 moodustumist.

Tervete doonorite ja ägeda leukeemiaga patsientide rakukultuuridel on näidatud, et IFN-a inhibeerib märkimisväärselt telomeraasi aktiivsust, raku jagunemiseks vajalike telomeeride pikkust reguleerivat ensüümi. On korduvalt kinnitatud tõendeid selle kohta, et IFN-y suurendab FAS antigeeni ja kaspaasi 3 ekspressiooni ja seeläbi indutseerib luuüdi (CD34 +) eesnäärme apoptoosi.

On tõendeid selle kohta, et IFN-a toimib sarnaselt ja selle apoptootilise toime mõju suurendab selle poolt põhjustatud anti-apoptootilise Bax-molekuli killustatus. IFN-a suurendab ka tuumori nekroosifaktori vabanemist verre, mis on suunatud kasvajarakkude degradeerumisele.

Seega on siiani kättesaadavatest andmetest ilmne, et interferoonidel on proliferatsioonivastane aine, sealhulgas kasvajavastane toime, mida rakendatakse mitmel, sageli omavahel seotud viisil. Interferoonide kasvajavastases efektis on olulised nii kirjeldatud meetodid otsese toime kohta kasvajale kui ka kaudsed kasvajavastased mehhanismid, mis on seotud makrofaagide aktiivsuse suurenemise, T-rakkude aktiveerimise, looduslike tapjate ja antikehade tootmise suurenemisega.

Antiproliferatiivne toime on

Epidemioloogia ja mikrobioloogia instituut. N.F. Gamalei RAMS, Moskva

Antiproliferatiivne toime

Väga tundlik kasvajarakkude AP-toime suhtes, mida iseloomustab pidev kontrollimatu kasv, seega avaldas AP-i toime lootust IFN-i kasvajavastasele aktiivsusele. Selle probleemi uurimisel osales sadu teadlasi, sageli ühendades need kaks mõistet, mis on kliiniliselt vale.

IFN-i kasutamine suurtes annustes (> 1 miljonit RÜ) avaldab AP-i peamiselt tsütopeenia. Vereloome süsteemi rakud on väga tugevad IFN-i suhtes. See pärsib nii kasvu kui ka luuüdi ja põrna koloniseerumist. Mitogeen-stimuleeritud lümfotsüütide paljundamine on samuti alla surutud. Reeglina on lümfoidarühmad IFN-i suhtes tundlikumad kui müeloidid. Vähem on tundlik interferooni erütropoeesi toime suhtes.

Kuid IFN kasutatakse suurte ööpäevaste annustega (3-15 MIU), põhjustas rakkude vähenemist (vähendades tsirkuleerivate kasvajarakkude leukotsüüdid) keskmiselt 9 kuni 97,4x10 4,2x10 9 / l kahaneva suuruse põrna [28] patsientidel krooniline müeloidleukeemia. Mõju sõltus ravimi kasutatavatest annustest (st saavutatud AP-efekti tõttu), kuid selleks, et saavutada kasvajavastast toimet ja ravimist, sealhulgas luuüdi siirdamist, vajas lisameetmeid.

AP toime on pöörduv. IFN hematopoeesi kasutuselevõtmise peatamine on täielikult taastatud. Kasvajarakkude kasvu jätkub ka. AP-i toime hoidmiseks organismis on vajalik IFN-i suurte annuste pidev sisseviimine.

AP efekt on kindlasti seotud aktiveerimist 2 ', 5'-oligo (A) süntetaasi, nagu ka teiste kultuuride kattuvad Layer 2', 5'-oligoadenülaatide tsütoplasmas ja raskuse mahasurumine vohamist. See seos pole veel selge. Üks ei ole kahtlust, et AB ja AP arengu molekulaarsed mehhanismid järgnevatel etappidel näivad olevat erinevad. Näiteks pärsib koolera toksiin, tsütoplasmaatilise membraani füüsikalis-keemiline seisund ja cAMP-i tase, kuid ei inhibeeri AV-i oleku arengut, vaid selle mõju [29]. Sarnasel tegevusel on teatud kontsentratsioonides oubain, puromütsiin ja tsükloheksimiid.

Naha-lihaste, mesenhümaalsete ja epiteliaalsete kudede rakud on organismis tavaliselt resistentsed IFN-i AP-toimel. AP-efekti mõõtmiseks kasutatud kõige tundlikum mudel on Burkitti lümfoomiga patsientidest isoleeritud Daudi-liin B-lümfotsüüdid. Retrospektiivse analüüsi põhjal võib järeldada, et proliferatsioonivastase potentsiaaliga on kõige aktiivsem IFN-a. See on sageli 10-20 korda efektiivsem kui IFN-a. IFN-i ja IFN-i aktiivsus varieerub sõltuvalt rakkude tüübist, kuid sagedamini on IFN-i eelised naha-lihaste kudede rakkudele. Antiproliferatiivse potentsiaali korral kehtib IFN-i järgmine rida: IFN-> IFN-> IFN-. Tuleb meeles pidada, et AP-i toime on kogu IFN-i suhtes oluline ja see avaldub alati suurtes annustes kasutamisel kliiniliselt. Kuna kliiniline sündroom on tavaliselt pöörduv tsütopeenia, on soovitav kasutada IFN-i ööpäevastes annustes> 1 miljon RÜ hematopoeetiliste aktivaatoritega, näiteks leukinferooniga.

AP toime avaldub ainult IFN-i interaktsioonis spetsiifiliste retseptoritega, millele järgneb makromolekulide sünteesi sügav rikkumine. Rümptaan mutandid, mis on kaotanud oma retseptori, muutuvad nii viirusevastaseks kui ka antiproliferatiivseks. Samuti tuleks meeles pidada, et antiproliferatiivne toime väikestes annustes on tsütostaatiline: rakkude kasv on pärast IFN-i eemaldamist täielikult taastatud, kuigi see võtab aega - vähemalt 24 tundi [30, 31].

Arvukate tähelepanekute [32] ülevaate tulemusel jõuti järeldusele, et IFN-i proliferatiivne toime avaldub eriti ettevalmistava ajavahemiku jooksul (faas G0, G1, G2), seetõttu on vähemtundlikud rakud, milles see periood on lühike ja DNA-süntees (S-periood) on intensiivne või on nad mitoosi faasis (M-faas).

On teada, et tsütoplasmas on 2 ', 5'-oligoadenülaadi põhiline tase, mis on vajalik proliferatsiooniks. Kuid IFN-i kasutuselevõtul enamikus kudedes võib nende tase tõusta 10-15 korda. Seega, hiirtel, kes said IFN-i, suureneb põrn, kopsud, maks ja vähemal määral ka hingamisteede ja aju sisaldus 2 ', 5'-oligoadenülaati 2-5 tunni jooksul [33]. Sel juhul ilmnevad Daudi tsütoplasmas uued valgud, mille molekulmassid on 15, 16, 20, 53, 79, 87 ja 105 kDa, ja ainult ühe valgu tase väheneb - 23 kDa. Sama liini AP-toime suhtes resistentsete mutantsete rakkude korral ei ole selgelt indutseeritud ainult üks valk, 15 kDa. Teiste valkude tase on oluliselt vähenenud, kuid need on ikkagi avastatud. Samal ajal pärssis IFN-i ka c-myc rakkude proto-onkogeeni ekspressioon [34].

Praeguseks on teada, et inimese genoomis on umbes 40 rakulisi proto-onkogeene, mida ekspresseeritakse ainult embrüonaalsetes rakkudes, kuid madala aktiivsusega küpsetel rakkudel. Vastavalt avaldatud andmetele, näiteks Xenopus laevis ajal munarakku küpsemist igaühes neist akumuleerub 8000000 geenikoopiat koos-myc, küpsetes munade etapi tasemel jäid samuti väga kõrge - 5000000 ühikut, kuid siis pärast viljastumist nad jaotunud lõhustumise ja iga tadpole-rakk sisaldab juba 20-50 koopiat c-myc-st, st umbes sama kui inimene.

Inimese genoomis on c-myc vähe ekspresseeritud küpsetes rakkudes. Kuid embrüogeneesi ajal ja ka kirurgiliste operatsioonide käigus esinevad teise geneeziumi, c-myc ja teiste kasvu onkogeenide c-ras ja c-abl parandamise ja regenereerimise protsessid. Need proto-onkogeenid on proliferatsiooni esilekutsumiseks hädavajalikud. Kasvu proto-onkogeenide aktiveerimine stimuleerib rakke faasi G üleminekuks0/ G1 rakutsükli järgnevatele etappidele - S, G2 ja mitoos (M). Siiski on koekasv geneetiliselt määratud ja rangelt kontrollitud, kaasates kasvufaktorid, kontakti inhibeerimise ja apoptoosi faktorid [22]. Proto-onkogeenide kasvu ekspressiooni peamine regulaator on p53 valk, mille geen on laialdaselt esindatud imetaja genoomis.

Vereloome süsteemi rakkudes põhjustab p53 geeni ekspressioon füsioloogilist fenomeni - programmeeritud surma - apoptoosi. Välistatakse selle valgu bcl-2 geeni. Seega suurenenud ekspressiooni Protoonkogeenide kasvu loob tingimused kontrollimatul kasvu ja pahaloomulise (eriti punktmutatsioonid, muundamine proto..oncogene viiakse onkogeeniks või viiduna viiruse genoomi ja viirusliku võimendaja mõju). Nende ekspressiooni vähenemine IFN või p53 toimel (Rb valk on samuti seotud, mida siinkohal ei loeta) pärsib kasvu ja proliferatsiooni. Kuid loomulikult ei ole need protsessid piiratud, tegelikult on need palju keerulisemad.

Tuumori muundamisel peaks ilmnema c-myc ja teiste kasvu-onkogeenide aktiveerimine. Huvitav on see, et transformeeritud fenotüübi säilitamiseks on vajalik onkogeenide konstantse ekspressiooni ja sellest tuleneva onkoproteiinide olemasolu tsütoplasmas. Onkoproteiinide sisestamine normaalsesse rakku viib fenotüübiliste transformatsioonimärguannete ilmnemiseni, mis hakkavad kaduma, kuna onkoproteinid lagunevad. Onkotipude vastaste antikehade sisseviimine transformeeritud rakkude tsütoplasmasse viib ka fenotüübiliselt normaalsete rakkude ajutise taastamise. Seega saab fenotüübilise normi abil tagastada transformeerunud rakk, mis on kaotanud oma erifunktsioonid (diferentseerumine) ja mida iseloomustab kontrollimatu kasv, inhibeerides samal ajal IFN-i mõjul kasvavate onkogeenide ekspressiooni. On äärmiselt oluline teada iga arst.

On mitmeid viise aktiveerimiseks rakulise protoonkogeenidega - punktmutatsioonidest, genoomi amplifikatsiooni kogunemine transkriptide või lõpuks translokatsiooni geenide kirjeldati krooniline müeloidne leukeemia (c-abl 09:22 geen) või Burkitt lümfoom (geeni-myc 08:14) [35]. Uut promootorit mõjutab translokatsioonigene ja seda saab aktiveerida. Onkogeensed viirused, mis neid onkogeene kandvad (tavaliselt väikeste muudatustega) ja mis suudavad neid genoomi integreerida, võivad mängida olulist rolli. Siiski ei ole mingit kahtlust, et p53 geeniga seotud punktmutatsioonid, mis leitakse vähemalt 50% USA-st ja Inglismaalt iseloomulikest kasvajarakkudest, on kõige tõenäolisemalt inimese kasvajad [36]. Eeldatakse, et p53 geeni mutatsiooni fakt, mis vähendab kasvuhoogude kasvu põhjustavate onkogeenide aktiivsust, tekitab ainult kasvaja kasvu tingimusi. Nende kliinilisi ilminguid peaks oodata intervallis kuni 30 aastat, kui muud signaalid on sisse lülitatud või kasvajavastase immuunsuse mehhanismid nõrgenevad.

IFN-i võime ennetada kasvajavastaseid protsesse on vaieldamatu, kui see mõjutab ainult kasvu-onkogeenide ekspressiooni. Kuid neid ei uurita üldse.

Kasutades c-myc geeni näidet Daudi rakkudes esmakordselt 1984. aastal, näidati, et I tüüpi IFN-i võib pidada kasvavate onkogeenide ekspressiooni negatiivseks regulaatoriks, mis vähemalt osaliselt selgitab AP-i toimet normaalsetes kudedes [37]. Hiljem täheldati seda efekti ka teise c-Ha-ras kasvutekogeeni kasutamisel. Seda efekti rakendatakse sagedamini onkogeeni translatsiooni tasemel (valgu tase). Kasutades c-myc-näidet, näidati, et Okazaki DNA fragmentide ligeerimiseks ühte heeliksit on vaja p62 kDa DNA-siduvat valku, mis on c-myc produkt. Selle pärssimine IFN-i kasutuselevõtuga takistab uue DNA sünteesi, millele järgneb proliferatsiooni pärssimine.

Kuid on ka teisi näiteid replikatsiooni inhibeerimise kohta, millel puudub tugev mõju proto-onkogeenide kasvu (monotsüütide seeria I-937, HL-60, Friend's erütroleukeemia, Balb c / 3T3) rakkude ekspressioonile. 2 ', 5'-oligo (A) süntetaasi-RNaas-süsteemi süsteem võib selles protsessis mängida olulist rolli, tagades proliferatsiooniks vajaliku äsja sünteesitud mRNA halvenemise [38].

Immunomoduleerivad mõjud

Enam kui kümne aasta jooksul on IFN preparaate kasutatud viirusevastaste ainetena, mis võivad kaitsta rakku viirusliku infektsiooni eest, ilma et see osaleks immuunfunktsiooni toimetajatest. Kuigi juba paljudel kliinilistel vaatlustel, näiteks haavade, sealhulgas väga nakatunud protsesside [39, 40] ja ulatuslike põletuste [41] reageerimisprotsesside stimuleerimisel ei leitud üldist skeemi ja vajasid uut mõtlemist [2].

Suur huvi aitasid Hollandis asuvas primaatide keskuses läbi viidud uuringud, mis näitasid, et ahvid, mis on nakatunud väga vastuvõtliku vaktsiiniaviiruse tüvega või selle mutandiga, mis on IFN-i suhtes resistentne ja mis on kehas praktiliselt võimatu (> 10 000 RÜ), millele järgneb IFN-i ravimisel ei esinenud arenenud immuunsuse kliinilises dünaamikas ja intensiivsuses märkimisväärseid erinevusi. Mõlemal juhul takistas IFN viiruslikku kahjustust. See näitas IFN-i poolt aktiveeritud immuunfunktsioonide efektiivsuse tähtsust viiruse eliminatsiooniprotsessis ja sellele järgnenud kliinilise taastumise protsessis.

Tänapäeva vaatepunktist võib väita, et organismis on IFNi peamine funktsioon [4], on mittespetsiifiliste rakuliste immuunvastuste aktivatsioon ja efektorite regulatsioon immuunvastuses. Kui patogeeniga interakteerutakse, tekivad IFN-id makrofaagide ja lümfotsüütide poolt, tekib põletikuline reaktsioon, mis põhjustab patogeeni hävitamist keskendumisel normaalsete kudede minimaalse kahjustusega. On teada, et normaalset tervist toetavad peamiselt mittespetsiifilised rakulised immuunreaktsioonid, mida teostavad teadaolevad immuun-efektorite triaadid: makrofaagid, T-helper-lümfotsüüdid ja neutrofiilsed fagotsüüdid. Makrofaagi sellisel juhul loetakse universaalseks antigeeni esitlevaks rakkudeks (APC), mis esitab töödeldud antigeeni T-lümfotsüütidele koos tsütokiinide aktiveerimisega. AIC rolli teostavad ka dendriitrakud ja Langerhansi rakud (nahk). Kuid nähtuse olemus ei muutu. APC esitleb töödeldud antigeeni, mis on kompleksis koesobivusantigeeniga (MHC) klass 2 (viirus- ja tuumorantigeenidest kompleksis MHC klass 1), mis tuleb tunnustada T-raku retseptori (TCR) Cle + lümfotsüüdid. On teada, et töödeldud antigeeni immunogeensus suureneb ligikaudu 10000 korda ja 100 klassi 2 antigeeni + MHC kompleksi suudab interakteeruda 18 000 TCRiga [42]. See iseloomustab immuuntuvastuse efektiivsust.

Antigeeni rolli saab teostada mis tahes patogeeniga, mille esmakordselt surmatakse peroksiidide surmamise reaktsioonide abil, seejärel sisestatakse. Järgnevad mittespetsiifilised reaktsioonireaktsioonid on toodud joonisel. 1. Antigeeni toimel tuleb aktiveerida makrofaag, tekitades autokriinsed INF-a ja IL-6. MHC klassi 2 antigeenid ei avaldata makrofaagidele pidevalt ja nende välimust stimuleerivad IFN-a ja IL-4. Protsessi pärsib transformeeriv kasvufaktor TGF-α, mida võib toota ka makrofaagid. IFN-i allikas on alati aktiveeritud T-lümfotsüüdid.

Makrofaagide ja T-helperlümfotsüütide otsest kokkupuudet, mis viiakse läbi klassi 2 antigeeni + MHC ja TCR struktuuride kaudu, täiendab ka transmembraanseid glükoproteiine ICAM. See annab immuunvastuse piiramise, kuid ei ole piisav T-lümfotsüütide aktiveerimiseks. Teine signaal on vajalik aktiveeritud makrofaagide poolt toodetud tsütokiinide kompleksi kujul: need on peamiselt IFN-a, samuti IL-1, IL-6, IL-12, TNF-a, mis interakteeruvad T-abistajarakule vastava retseptoriga.

Aktiveeritud T-abistaja lümfotsüüdi, säilitades makrofaagid söötmesse vabaneb tsütokiinide nagu IFN (stimuleeriv MHC klass 2) ja IL-4 (aktiveerimiseks MHC klass 1 geenide) ja LIF MIF säilitades makrofaagid põletikus ja kolooniate faktorid (CSF) - M-CSF ja GM-CSF. Aktiveeritud makrofaagide ja T-helper-lümfotsüütide vastastikku tasakaalustatud toime tõttu säilitatakse nende aktiveerumisrežiim ja immuunvastuse võimendamine, kiirendades varasemate monotsüütide / makrofaagide prekursorite makrofaagide diferentseerumist.

Signaalid makrofaagide aktiveerimine (IFN, IL-1, TNF, IL-8, G-CSF ja GM-CSF) ja T-helper-lümfotsüüdid (IFN, IL-3) tajutud neutrofiilsetes fagotsüüdid, soodustada nende diferentseerumise, stimuleerides fagotsütoossete funktsioon. See suurendab kõiki fagotsütoosi parameetreid - küpsete segmenteeritud neutrofiilide arv, peroksiidide tekitamine, fagotsüütide indeks ja arv ning samuti (mis kõige tähtsam) fagotsütoosi valmimine. Võime öelda, et see ring suletakse.

Kogu süsteemi peamine negatiivne signaal on IL-10, mida saab toota nii makrofaagide kui ka T-lümfotsüütide poolt. Kuid peamine reguleeriv roll selles protsessis kuulub ilmselt T-lümfotsüütide hulka. Spetsiifilised antikehad ei pruugi neis reaktsioonides osaleda.

Summaarsed rakulise reaktsioonid antigeeni elimineerides kaasates makrofaagid (või muud APC), T-lümfotsüütide ja polümorfotuumaliste fagotsüüdid, milles puudub vajadus proliferatsiooni ja diferentseerumist T lümfotsüüdid võib pidada esimese etapi immuunvastust. See on tihedalt seotud järgmise - teine ​​etapp, mis algab tasandil vohavate T-lümfotsüüdid ja määrab põhisuund järgnevates reaktsioonides organismi patogeeni kui need sisalduvad algust raku (eelkõige DTH) või humoraalset immunogenesis rada.

Immuunvastuse esimene faas on pidevalt toimiv ja on ilmselt peamise viivitamatu reaktsioon keha vähese patogeensusega koormusega. See lülitub sisse kohe pärast antigeeni äratundmist. Selle osalejad on selle hetkeni diferentseeritud immuuntoojurid, kuid teisalt on see see, kes loob aluse järgnevateks immuunreaktsioonideks. Immuunvastuse esimese faasi reaktsioonide kaitstav roll on äärmiselt suur ja arst näib olevat alahinnatud.

Sisselogimine oma kontole

A.N. Mooses, Ph.D. niiske Sciences, LLC "BIOTECH-FARM", Peterburi

P.I. Baryshnikov, Dr märg. Teadused, professor, Altai AGAU, Barnaul

Tsütokiinide perekond sisaldab interferoone (edaspidi IFN), interleukiinide, kemokiinide, kasvu ja kolooniat stimuleerivaid tegureid, mis on immuunsüsteemi signaaliülekande polüpeptiidi molekulid. Oma laia bioloogilise aktiivsuse spektriga seonduvad nad mitte ainult immuunvastuse piisava tasemega, vaid reguleerivad ka keha põhiliste integratiivsete süsteemide - närvisüsteemi, immuunide ja endokriinide - interaktsioone.

Enamiku tsütokiinide struktuuri ja toimemehhanismi iseloomustatakse üsna täiesti. Geenitehnoloogia ja kaasaegse biotehnoloogia meetodite kasutamise tõttu toodetakse praegu palju tsütokiine rekombinantsete preparaatide kujul, mis on identsed endogeensete molekulidega koguses, mis on piisav nende kliiniliseks kasutamiseks.

Paljud mikroorganismid - bakterid, pärm, viirused - kasutatakse välismaise geneetilise materjali saajatena, et saada rekombinantseid tüvesid - biotehnoloogiliste toodete tootjaid. Nii saadi E. coli rekombinantsed tüved, mis toodavad interferooni, insuliini, kasvuhormoone, mitmesuguseid antigeene; B. subtilis'e tüved, mis toodavad interferooni; pärmi tootvad interleukiinid jne

Rekombinantsete tsütokiinide kasutamine, mis tagab immuunse düsfunktsioonide piisava ja sihipärase meditsiinilise korrigeerimise, suurendab immunoteraapia ja ravi üldiselt tõhusust. Keha sisse viidud tsütokiinid kompenseerivad endogeensete regulatoorsete molekulide defitsiiti ja avaldavad nende toimeid täielikult. See on eriti oluline raske või kroonilise patoloogia korral, kui traditsiooniliste immunomodulaatorite või tsütokiini sünteesi indutseerijate kasutamine on immuunsüsteemi kompenseerivate võimete vähenemise tõttu kasutu. Praegu on rekombinantsete tsütokiinidega ravimine üks kõige paljutõotavamaid ja üha laienevaid immunofarmakoloogia valdkondi.

Niisiis on viirusevastased ja antiproliferatiivsed efektid esimese tüübi interferoonid (edaspidi IFN-a, IFN-β). Immuunvastuse molekulaarsete mehhanismide kaasaegsete ideede valguses on eriline koht gamma interferoon (edaspidi - IFN-y) - immuunvastuse regulatoorne tsütokiin.

Rekombinantsete interferoonide põhjal on mitmesugused ettevõtted välja töötanud loomi ja inimesi ravimeid, mida kasutatakse nakkushaiguste, peamiselt viraalse etioloogia, ravimiseks ja vältimiseks.

Erinevate etioloogiatega seotud haiguste ravis ja ennetamisel loomade ja inimeste rekombinantne IFN annab immuunsete düsfunktsioonide piisavat ja sihipärast meditsiinilist korrigeerimist, täiendades endogeensete regulatoorsete molekulide defitsiiti ja täielikult nende toimet. Nende toimete kõrge immunokorrektiivne efektiivsus, prognoositavus ja selektiivsus tulenevad spetsiifiliste retseptorite olemasolust rakkudes ja loomulike mehhanismide olemasolu nende kõrvaldamiseks. Rekombinantse IFNi baasil põhinevad farmatseutilised preparaadid on patogeneetiliselt immuun-orienteeritud ravimeetodid, millel on nii otsene asendus kui ka mitmesugused induktiivsed toimed. Praegu kasutatakse neid laialdaselt nakkuslike, onkoloogiliste ja muude loomahaiguste ravis.

Interferooni klassifikatsioon

Interferoonid (IFN, IFN) on üldnimetus, mille all ühendab praegu rea välismaiste ainete sissetungi korral viirusliku infektsiooni või antigeense toime tõttu reageerivate reaktsioonide käigus organismi rakkudes sünteesitud arv bioloogiliselt aktiivseid valke või glükoproteiine. Tänu interferoonidele muutuvad rakud viiruse suhtes immuunseks.

Interferoonid on mitmesuguste funktsioonidega indutseeritavate tsütokiinide multigenic perekond, sealhulgas viirusevastane, antiproliferatiivne, kasvajavastane ja immunomoduleeriv.

Praegu on teada rohkem kui 20 IFN-i, mis erinevad struktuurist, bioloogilistest omadustest ja domineerivast toimemehhanismist. IFN on jagatud kolmeks:

• I tüüp, mida tuntakse viiruse interferoonina, sisaldab IFN-α (aktiveeritud monotsüütide ja B-lümfotsüütide poolt sünteesitud leukotsüütide), IFN-β (fibroblastiline, sünteesitud fibroblastide, epiteelirakkude ja makrofaagide poolt) ja teiste IFN-ide abil. Esimest tüüpi (IFN-a, IFN-β) iseloomustavad peamiselt viirusevastased ja antiproliferatiivsed toimed ning vähemal määral immunomoduleerivad mõjud. Need toodetakse kohe pärast koosolekut patogeeniga - need on indutseeritud viirusinfektsiooni protsessis, nende tegevus on suunatud patogeeni lokaliseerimisele ja selle leviku vältimisele organismis. IFN-a ja -β indutseerijad on viirused, RNA (eriti kaheahelalised), lipopolüsahhariidid (LPS), mõnede bakterite komponendid. Viiruste seas on tugevaim interferooni indutseerija RNA genoomne. DNA viirused on nõrgad indutseerijad (välja arvatud poksviirused).

• II tüüp, mida tuntakse immuunina, sisaldab IFN-y (sünteesitud aktiveeritud T-lümfotsüütide ja NK-rakkudega). Teise tüübi (IFN-y) interferoonide peamine toime on osalemine immuunreaktsioonides. See hakkab tootma nakkusprotsessi järgnevatel etappidel juba sensibiliseeritud T-lümfotsüütidega ja osaleb aktiivselt konkreetse immuunvastuse kaskaadis. Interferoonogeensed ained, antigeenid, T-mitogeenid ja mõned tsütokiinid on võimelised indutseerima IFN-γ produktsiooni. IFN-γ märklaudrakud on makrofaagid, neutrofiilid, looduslikud tapjarakud, tsütotoksilised T-lümfotsüüdid, millel on IFN-y pinnal retseptorid. IFN-y produktsioon on tsütokiinide kontrolli all. IL-12 ja IL-18 võimendavad oma ekspressiooni ja IL-2 aitab kaasa CD4 + lümfotsüütide funktsiooni, mis aktiveerib IFN-γ produktsiooni. Inimesele on IFN-y taustne kogus alati kehas olemas, isegi kui infektsiooni ei esine: näiteks tervetel inimestel ja loomadel on interferooni staatuse analüüsil alati kindlaksmääratud kogus IFN-i veres, stimuleeritud või nakatunud, see suureneb mitu korda. Kuid herpesinfektsiooni ajal ja kasvajaprotsessi lõppfaasides kipub IFN-γ kogus null, kuna herpese viirus ja vähirakud toodavad valke, mis blokeerivad IFN-γ sünteesi. Seega on herpesviiruse infektsioon ja vähk interferooni indutseerijad mõttetu, nad tuleb viia kehasse väljastpoolt.

• III tüüp avastati hiljem I ja II tüübi puhul; Teave selle kohta viitab III tüüpi IFN-i tähtsusele teatud tüüpi viirusnakkustes.

Viiruse interferoonid (IFN-a / β) indutseeritakse viirusnakkuse ajal ja II tüübi interferoonide (IFN-γ) sünteesi indutseerivad mitogeensed või antigeensed stiimulid. Enamiku viirusega nakatatud rakkude tüübid on võimelised sünteesima IFN-a / β rakukultuuris. Seevastu IFN-γ sünteesitakse ainult mõnede immuunsüsteemi rakkudega, kaasa arvatud looduslikud tapjarakud (NK), CD4 T-rakud ja CDS-i tsütotoksilised supressorrakud.

Interferooni viirusevastane toime

Interferoonid ei toimi otseselt viirusega. Nende mõjul muutub rakk vastupanu nakkusele. Interferoonid on viirusliku nakkuse vastase kaitse esimene rida, sest neid hakatakse viivitamatult pärast kokkupuudet viirusega tekitama. Samal ajal on ravivastuse raskus otseselt proportsionaalne nakatamisdoosiga.

Mõned viirused võivad blokeerida IFN-i viirusevastast toimet. Näiteks tekitavad adenoviirused spetsiifilist RNA-d, mis takistab proteiinkinaasi aktiveerimist.

IFN seondumine retseptoriga kutsub esile kolme raku üheaegselt esinevat protsessi, mis lõpeb:

• varjatud endoribonukleaasi aktiveerimine, viiruse RNA hävitamine;

• viirusliku informatsiooni RNA sünteesi pärssimine;

• viiruse ümbrise valgusünteesi pärssimine.

Need mehhanismid integreeruvad viirusevastase toimega, viies viiruse replikatsiooni supressiooni.

Interferooni immunomoduleeriv toime

IFN-id ei ole mitte ainult viirusevastased, vaid ka immunomoduleerivad toimed, mis on seotud peamise histoloogilise kokkusobivuskompleksi (MHC) retseptorite ekspressiooniga. IFN suurendab I klassi MHC molekulide ekspressiooni igat tüüpi rakkudes, parandades seega nakatatud rakkude tuvastamist tsütotoksiliste T-lümfotsüütide (CTL) poolt. Lisaks suurendab IFN-γ MHC klassi 2 molekulide ekspressiooni antigeeni esitlevates rakkudes, mille tulemuseks on viiruse antigeenide parem esitlemine CD4 + lümfotsüütidega ja looduslikud tapjarakud (NK-rakud) aktiveeritakse. IFN-id stimuleerivad ka fagotsütoosi.

Tsütokiinide, sealhulgas interferoonide immuunvastuse reguleerimine toimub vastavalt relee põhimõtetele, tsütokiini toime rakule põhjustab teiste tsütokiinide (tsütokiinide kaskaadi) moodustumist.

Interferooni antiproliferatiivne toime

IFN-i proliferatsioonivastast toimet selgitatakse järgmiste mehhanismidega:

• tsütotoksiliste rakkude aktiveerimine;

• kasvajaga seotud antigeenide suurenenud ekspressioon;

• antikeha tootmise moduleerimine;

• kasvaja kasvufaktorite toime inhibeerimine;

• RNA ja kasvajarakkude valkude sünteesi pärssimine;

• rakutsükli aeglustumine üleminekuga puhkefaasi;

• kasvajarakkude stimuleerimine küpseks;

• leviku piiramise kontrolli taastamine;

• uute veresoonte moodustumise inhibeerimine kasvajas;

• tsütostaatilise aktiivsuse biomodulatsioon: metabolismi muutus ja kliirensi vähenemine;

• ravimiresistentsuse ületamine mitme ravimiresistentsuse geeni pärssimise tõttu.

Interferooni antibakteriaalne toime

Viimastel aastatel on näidatud, et IFN-il on ka antibakteriaalne toime, mis põhineb IFN-i võimetel mõjutada teatud rakkude aktiivsust teatud ensüümides.

Lisaks sellele on IFN-γ antibakteriaalne roll makrofaagide aktiveerimiseks, mis tekitavad proinflammatoorseid tsütokiine, samuti hapniku ja lämmastiku aktiivseid vorme, prostaglandiinid. Need tegurid soodustavad bakterite surma põhjustanud põletikulist protsessi.

Seega on kõik interferoonid polüfunktsionaalsete valgutegurite rühm, millel on erineval määral väljendunud viirusevastane ja kasvajavastane toime. IFN-α on kõigi interferoonide seas kõige tugevam viirusevastane aktiivsus ja IFN-γ omab tugevamat antiproliferatiivset aktiivsust. Kõigil interferoonidel on erineva raskusega immunoregulatoorne toime (maksimaalne IFN-γ) - need suurendavad makrofaagide, T-lümfotsüütide ja NK-rakkude aktiivsust.