Üheahelalise (denatureeritud) DNA antikehad (anti-ssDNA) on autoantikehad, mis tekivad siis, kui inimese immuunsüsteem ei suuda eristada omaenda ja välismaiste rakkude komponente.
Anti-ssDNA tekib süsteemne erütematoosne luupus (SLE), skleroderma ja reumatoidartriit, samuti paljud muud mittereumaatilised haigused. Üheahelalise (denatureeritud) DNA antikehad on väga mittespetsiifilised ja neid saab tuvastada paljude patoloogiate puhul. Lisaks võivad kaheahelalise DNA antikehad ristreageerida üheahelaliste immunoglobuliinidega, mis muudab analüüsi tulemuste tõlgendamise raskeks.
Üheahelalise DNA antikehade tase määratakse kindlaks, et hinnata süsteemse erütematoosse luupuse ja uurimistööde raskusastet.
SLE-i sümptomiteks on liigesevalu, lööve, väsimus, neerufunktsiooni häired. Kõige sagedamini registreeritakse süsteemset erütematoosluupust 15... 40-aastastel naistel. Haiguse põhjus on endiselt ebaselge, kuid eeldatakse, et SLE-le tekib geneetiline eelsoodumus.
Üks kõige raskemaid SLE-i tüsistusi on lupus-nefriit, mida iseloomustab selge neerupõletik. Lupus-nefriit põhjustab valgu esinemist uriinis, vererõhu suurenemist ja neerupuudulikkust.
See analüüs võimaldab tuvastada üheahelalise (denatureeritud) DNA antikehi. Analüüs aitab diagnoosida süsteemset erütematoosluupust.
Immunoensüümide analüüs - ELISA.
Andmed näitajate kontrollväärtuste kohta ja analüüsis sisalduvate näitajate koosseis võivad sõltuvalt laborist veidi erineda!
Üheahelalise DNA antikehad on denatureeritud DNA molekulide vastu suunatud antinuclear-spetsiifiliste immunoglobuliinide tüüp. Anti-ssDNA tuvastatakse 70-80% süsteemse erütematoosluupusega patsientidest, kuid nende tootmine ei ole selle haiguse suhtes spetsiifiline. Seda analüüsi kasutatakse SLE jälgimiseks, luupuse nefriidi kindlakstegemiseks. IgM klassi antikehade määratlust kasutatakse luupuse sündroomi keerulises diagnoosimisel. Veri võetakse veenist, AT-i tase määratakse ELISA-ga. Tavaline tulemus on "negatiivne", indeks on väiksem kui 20 RÜ / ml. Katse tingimused on 1 päev.
Üheahelalise DNA antikehad on denatureeritud DNA molekulide vastu suunatud antinuclear-spetsiifiliste immunoglobuliinide tüüp. Anti-ssDNA tuvastatakse 70-80% süsteemse erütematoosluupusega patsientidest, kuid nende tootmine ei ole selle haiguse suhtes spetsiifiline. Seda analüüsi kasutatakse SLE jälgimiseks, luupuse nefriidi kindlakstegemiseks. IgM klassi antikehade määratlust kasutatakse luupuse sündroomi keerulises diagnoosimisel. Veri võetakse veenist, AT-i tase määratakse ELISA-ga. Tavaline tulemus on "negatiivne", indeks on väiksem kui 20 RÜ / ml. Katse tingimused on 1 päev.
Antikulaarseid antikehi toodetakse B-lümfotsüütide poolt, kui immuunsüsteem reageerib oma organismi rakutuumade fragmentidena kui võõrad ained. Komplemendisüsteem aktiveerub, tekib põletik, autoimmuunne koekahjustus. Üheahelalise DNA antikehad ei ole spetsiifilised, neid toodetakse paljudes haigustes, enamasti SLE-i pahaloomulistes vormides, sklerodermas ja reumatoidartriidis. Uuringu madal spetsiifilisus piirab selle kasutamist autoimmuunsete patoloogiate diagnoosimiseks, kuid SLE-i (kuni 80%) suhteliselt kõrge tundlikkus võimaldab seda kasutada patsiendi jälgimise vahendina.
Anti-ssDNA produktsioon on reumaatiliste haiguste suhtes kõige iseloomulikum. Näidustused uuringuks:
Anti-ssDNA määratakse venoosse veri seerumis. Biomaterjali kogutakse hommikul. Toimingute ettevalmistamine on nõuandev laadi, mis sisaldab mitmeid piiranguid:
Veri võetakse kubitaalsest veenist, suletud katseklaasidesse viiakse laborisse. Biomaterjal tsentrifuugitakse, eraldatud plasmast eemaldatakse hüübimisfaktorid. Seerumit töödeldakse immunoloogilise testiga. Kogu menetlus ja andmete ettevalmistamine võtab 1 päev.
Tulemus normis märgitakse negatiivseks. See vastab anti-ssDNA kontsentratsioonile vahemikus 0 kuni 20 ME / ml. Võrdlusväärtused ei sõltu vanusest ega soost. Tõlgendamisel kaaluge paljusid tähelepanekuid:
Meetodi madala spetsiifilisusega väljendub paljude haiguste, mille AT tasemed on kõrgemad. Põhiväärtuse koguväärtuse kõrvalekalded:
Üheahelalise DNA antikehade test on kõige sagedamini kasutatav SLE jälgimise ja lupus-nefriidi avastamise meetodina. Uuringu diagnostiline väärtus on tühine. Reumatoloog, dermatoveneroloog, harvem - nefroloog, üldarst, tõlgendab tulemust ja määrab ravi.
Kui organismi immuunsuse regulatsioon ebaõnnestub, ilmnevad ebaõnnestumised. Keha seisundi varajane diagnoosimine on oluline, tuvastades muutused veres, tuleks kaaluda mitmesuguseid võõrkehi ja nende kasvu dünaamikat. Need on suunatud DNA vastu, molekuli enda tuum nihkub perifeeriasse ja need uuringud viiakse läbi haiguse kindlakstegemiseks.
Natiivse DNA antikehi saab avastada mitmesuguste levimuse meetoditega, see on suur protsent. Tuvastatud on nakkushaiguste all kannatavatel patsientidel. Mõnikord leitakse esmapilgul tervislikel inimestel, kuid pärilikkusega koormatud, arenevad sageli noortel aegadel. Mõjutatud rakkude tuum, moodustub nukleiinhape. Pärast tervete inimeste molekuli struktuuri muutuste avastamist tekib tavaliselt viiepubarad tavaliselt erütematoosluupus. Nahal on muutusi ja neerufunktsioon on kahjustatud. Seerumi tuvastamine, mis on seotud protsessi aktiivsusega või võib viidata meditsiinilisele prognoosile. Positiivset tulemust kinnitavad uuringuandmed.
Ravimite tekitatud luupuse kõrvaltoime on ravimite toime. Syndromid võivad provotseerida ravimeid, võttes samas fenütoiini, selliseid ravimeid nagu kinidiin, kloorpromasiin, hüdralasiin. Ravimi tühistamine vähendab võõrkehade taset. Kuus kuud on seerumis täielik kadumine.
Keha süsteemsete talitlushäirete korral toodetakse antikehi, mis on suunatud natiivsele kaheahelalisele DNA-le. Samal ajal halveneb immuunsus, neerude töö, aju kannatused ja veresooned põletikulised ja kahjustatud. Vaskulaarne kahjustus on otseselt seotud sidekoe kahjustuse hädavajaliku esinemisega, see mõjutab eakaid, võib-olla sensoorsete neuropaatiatega.
Natiivse DNA antikehi saab määrata, pärast SLE diagnoosimist on vaja teha ensüümi immunoloogiline analüüs, see võetakse ühe tööpäeva jooksul. Uuring viiakse läbi 2, 5 tundi. Analüüsi ettevalmistamine ei ole vajalik, võetakse tühja kõhuga, eritoetused ei ole vajalikud. Pärast venipunktsiooni tõmmatakse veri klaasist torusse. Analüüs viiakse läbi veenivere seerumiga, mis puhastatakse peptiididest ja valkudest. Juhtiva ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs.
Kui seerum sisaldab võõrosakeste suure sisalduse, näitab see lupus-nefriiti. SLE-de diagnoosimise aluseks on positiivne uuring. Tähtis on kehtestada võõrkehtumine, mis viitab DNA rikkumisele. Positiivse tulemuse kinnitamiseks viiakse läbi täiendavaid uuringuid. Ravi hindamiseks viiakse läbi seeria retsepti testid. Uurimuse määrab dermatoloog, nefroloog, dermatoveneroloog.
Nukleosiome moodustub DNA-ahelate kombineerimisel histooni-valkudega, on osa kromosoomist. Nukle on leitud septilistes tingimustes, vähkkasvajades ja SLE-patsientidel. Apoptoosis puruneb endonukleosoos DNA ja nukleosoomid sisenevad vereringesse.
Analüüsi positiivsed tulemused esinevad enamusel luupuse patsientidel ja nefriidiga patsientidel. Nad interakteeruvad tsükliinvalguga, mis hävib pärast rakkude jagunemist. 3% -l erütematoosse luupusega inimestel leitakse muutusi. Autoantikehade spetsiifilisus PCNA jaoks SLE jaoks on 99%. Luupusega patsientidel leitakse kesknärvisüsteemi kahjustus ja trombotsütopeenia.
Ribosomaalsete valkude autoantikehad on väga spetsiifilised SLE jaoks. See esineb hepatiidi ja kesknärvisüsteemi kahjustusega patsientidel psühhoosiga patsientidel.
Ribonukleoproteiinide antikehad on alamperekonna ANA, need on sageli SLE-s.
Lupus-psühhoosi haiguse agressiivsem käik, tuvastavad kesknärvisüsteemi kahjustused Sm-antikehade olemasolu. Levimus 5 kuni 40%.
Ühe kolmandiku patsientidest, kellel esineb progresseeruva skleroosi või polümüosiidi nähud, on U1-nRNP-vastased antikehad. Seda haigust nimetatakse Sharpe'i sündroomiks.
Kui SLE-i autoantikehad SS-le on naha ilmingute tõsised sümptomid. Sellised patsiendid on valgustundlikud ultraviolettkiirguse suhtes. Patsientidele, kellel on haiguse ravi kestus.
Difuussklerdermaalsete antikehade korral leitakse topoisomeraasi antikehi. Anti-tsentromeersed kandmised ei ilmne tervetel inimestel, kui sellised antikehad avastatakse, areneb Raynaud sündroom.
PM-Scl antikehadega patsiendid vajavad erilist tähelepanu kopsudele - kopsu ja kiulise alveoliidi fibroosile. M2 anti-mitokondrialased antikehad esinevad biliaarse tsüroosiga patsientidel.
Skleroderma, reumaatiliste haigustega patsientidel esineb Ro-52 antikehi.
Arvestades uuringute liiki, põhineb haiguste ajalugu saavutatud tulemustel. Immuunsüsteemi häired mõjutavad nahka, vereringet, sidekoe, neere, liigeseid ja muid elundeid. Luupuse antikoagulandi fraktsioonid võivad põhjustada hemorraagilise sündroomi progresseerumist. Võõrkehade esinemine veres varieerub haiguse kulgu. Suur hulk näitab progresseeruvat haigust. Kuid selline järjestus ei toimu alati. Kõrgendatud tase on iseloomulik ravimite luupuse, B- ja C-hepatiidi infektsioonide suhtes.
Tulemust mõjutab aktiivne ravi tõhusalt, kontrolli kaotamine ravikuuri üle. Oluline on rõhutada, et negatiivse tulemuse tuvastamine ei taga SLE diagnoosimist. Kõrvaliste mikroosakeste avastamine ilma kliiniliste muutusteta ei ole diagnoosi tegemise aluseks. Peate olema tervisliku seisundi tähelepanelik, et läbi viia immunoloogiline uuring. Kehast on palju häireid, mis ei ilmu ennast, mõnikord selgub, et on liiga hilja, et neid ravida. Tervisliku vaimu ja keha säilitamiseks soovitavad arstid igal aastal meditsiinilisi uuringuid.
Uurimistulemuste tõlgendamine sisaldab teavet raviarsti kohta ja ei ole diagnoos. Käesolevas jaotises esitatud teavet ei saa kasutada enesediagnostika ja enesehoolduse jaoks. Arst teeb täpset diagnoosi, kasutades nii uuringu tulemusi kui ka vajalikku teavet muudest allikatest: anamnees, teiste uuringute tulemused jne.
* Kindlaksmääratud ajavahemik ei sisalda biomaterjali võtmise päeva
Immunokhemiluminestsents (CLIA), kvantitatiivne
Selles jaotises saate teada, kui palju kulub selle uuringu läbiviimine teie linnas, vaadake katse kirjeldust ja tulemuste tõlgendamise tabelit. Moskva ja teistes Venemaa linnades "IgG klassi antikehade kahe-heeliksi (natiivse) DNA-d (IgG anti-dsDNA, anti-kaheahelalised (natiivsed) DNA IgG antikehad, anti-dsDNA-IgG anti-IgG klassi antikehad" Analüüsi hind, biomaterjalide protseduuri maksumus, uuringute meetodid ja ajakava piirkondlikes arstlikes büroodes võivad olla erinevad.
Uuring vere antikehade tuvastamiseks üheahelalise (denatureeritud) DNA-le, mida saab kasutada fokaalse sklerodermia aktiivsuse diagnoosimiseks ja hindamiseks.
Vene sünonüümid
Üheahelalise DNA antikehad, klassi G immunoglobuliinid;
Denatureeritud DNA antikehad;
Inglise keele sünonüümid
Ss-DNA antikeha;
Denatureeritud üheahelaline DNA antikeha;
Üheahelaline DNA antikeha.
Uurimismeetod
Ensüüm-seotud immunosorbentanalüüs (ELISA).
Mõõtühikud
Ühikut / ml (ühik milliliitri kohta).
Millist biomaterjali saab uurimistööks kasutada?
Kuidas õppimiseks valmistuda?
Uuringu üldine teave
Üheahelalise DNA antikehad (anti-ssDNA) kuuluvad antinukleaarsete antikehade rühma, st autoantikehadesse, mis on suunatud oma tuumade komponentide vastu. Anti-ssDNA antigeenid on üheahelalise DNA koostises lämmastikalused, nukleotiidid ja nukleosiidid. Enamiku inimeste veres saab avastada anti-ssDNA, mis kuulub immunoglobuliinide IgM klassi. Anti-ssDNA IgM klassil ei ole iseseisvat diagnostilist väärtust. Seevastu IgG klassi anti-ssDNA on iseloomulik paljudele süsteemsetele sidekoehaigustele, nagu näiteks süsteemne erütematoosne luupus, reumatoidartriit, polümüosiit / dermatomüosiit jne. Sageli esineb fosfaalse sklerodermaga patsientidel anti-ssDNA-d. Neid antikehi tuleb eristada antikehadest kuni kaheahelalise natiivse DNA-ga (anti-dsDNA), mis seostuvad kaheahelalise DNA osaga aluspaaridena, nukleotiidid ja nukleosiidid.
Anti-ssDNA tuvastatakse 50% -l fokaalse sklerodermia erinevat tüüpi patsientidest. Focal sklerodermat iseloomustab naha ja nahaaluse rasvkoe piiratud fibroos, kuid mõnikord võib see hõlmata lihaste ja luukude. Erinevalt süsteemsest sklerodermast on haiguse prognoos positiivne, kuna fokaalne sklerodermia ei mõjuta kunagi siseorganeid ja Raynaud 'nähtust ei täheldata. Fokaalsete ja süsteemsete sklerodermiate diferentsiaaldiagnostikas on võimalik uurida anti-ssDNA kontsentratsiooni. Need antikehad on iseloomulik lokaliseeritumale, fokaalsele sklerodermale. Süsteemse skleroosi spetsiifiline märk on Anti-Scl-70 olemasolu. On oluline märkida, et ssDNA-vastase uuringu negatiivne tulemus ei välista täielikult fookusskleroderma diagnoosi.
Anti-ssDNA-uuring on pediaatrilises dermatoloogias kõige suurem diagnostiliseks väärtuseks. Kõige sagedasem fokaalse sklerodermia vorm lastel on lineaarne sklerodermia (en coup de saber). Sellisel juhul toimub fibroos sirgjooneliselt sirgjooneliselt või esiosa piirkonnas või mööda neurovaskulaarset kimbu. Mis sügava atroofia kujunemine koos lihaste struktuuride kaasamisega muutub haigus invaliidiks. On näidatud, et sklerodermia lineaarsel kujul patsientidel seostatakse selle aluseks oleva lihaskoe suurte kontsentratsioonidega anti-ssDNA-d, mistõttu saab nende autoantikehade kontsentratsiooni uurimist kasutada haiguse prognoosi hindamiseks.
Anti-ssDNA tase peegeldab fokaalse sklerodermia aktiivsust. Nende autoantikehade suurim kontsentratsioon leitakse fokaalse sklerodermia üldise vormi abil. Kui haigus jõuab remissiooni, väheneb antikeha kontsentratsioon ja analüüsi tulemus võib muutuda negatiivseks. Sel põhjusel võib haiguse ravi kontrollimiseks kasutada ssDNA kontsentratsiooni uuringut.
Tuleb märkida, et anti-ssDNA esinemine ei ole rangelt spetsiifiline fookusskleroderma märk. Lisaks sellele võivad need autoantikehad leida tervete inimeste verd. Sel põhjusel ei näita positiivne katse tulemus alati haiguse esinemist. Analüüsi tõlgendamine toimub, võttes arvesse täiendavaid kliinilisi, laboratoorseid ja instrumentaalandmeid.
Mis on teadustöö?
Millal on plaanitud uuring?
Mida tulemused tähendavad?
Võrdlusväärtused: 0-20 U / ml.
Selles uuringus määratakse antikehade kontsentratsioon. Kui see on väiksem kui 20 U / ml, siis on tulemus "normaalne"; kui see on veelgi suurem, siis on tulemuseks "suurenenud sisu".
Mis võib tulemust mõjutada?
Olulised märkused
Samuti soovitatav
[13-007] Antikehad kaheahelalise DNA-le (anti dsDNA), skriinimine
[13-046] Ekstraheeritava tuuma antigeeni antikehad (ENA-ekraan)
[13-015] Antikehad tuuma antigeenidele (ANA), skriinimine
[Anonüümsed antikehad (anti-Sm, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, CENT-B, Jo-1, histoonid, nukleosoomid, RiboP, AMA-M2) immunoblot
[13-045] Hep-2 rakkude antinuclear tegur
Polümüosiidi (Mi-2, Ku, Pm-Scl, antisintetaasi antikehade (Jo-1, PL-7, PL-12) antikehad) diagnoosimine.
[13-019] Anti-fosfolipiid IgG antikehad
[13-013] Anti-fosfolipiid IgM antikehad
[13-059] Sidekoehaiguste skriinimine
[13-061] Anti-fosfolipiidide sündroomi diagnoosimine (APS)
[13-060] Süsteemse erütematoosluupuse diagnoosimine
Kes teeb uuringu?
Dermatoveneroloog, reumatoloog, lastearst, üldarst.
Kirjandus
T- ja B-lümfotsüütide funktsionaalse aktiivsuse häired peegelduvad immuunsupressiooni erinevate vormide kujunemises.
Süsteemne erütematoosluupus (SLE) ja reumatoidartriidi (RA) - krooniline autoimmuunhaigus (ABI) selgusetu etioloogia ja ulatusliku pildi immunopatogeneesiga, vähendada kvaliteeti ja pikendavad eluiga elanikkonnast, seega on peamised biomeditsiinilised ja sotsiaalsed probleemid [4; 3].
SLE-ga patsientidel on iseloomulik [IgG-ATi tase nDNA-le, millel on DNA-hüdrolüüsuv toime] [4; 5] ja tõenäoliselt osalevad patoloogilises protsessis. Kuid täna ei ole teadlaste hulgas üksmeelt AT-i panustamise üle nDNA-le AIS-i arendamisel ja käigul.
RA-s täheldati ka DNA-d hüdrolüüsivate antikehade taseme tõusu, kuid kliinilised tunnused erinevad SLE-st [3; 7]. Järelikult võib patoloogilise protsessi kulgu määrata mitte ainult DNA antikehade tase, vaid ka nende omadused, mis erinevad erinevate AID-de puhul.
Hiljutised uuringud on näidanud, et mõned DNA antikehad tungivad rakkudesse ja mõjutavad intratsellulaarset protsessi [9].
Üks võimalik järeldada, et IgG-antikehade dsDNA, suheldes DNA rakkude ja muutvate kromatiini struktuuri, disruptsiooniks apoptoosi immuunrakkude, mille tulemusena suureneb apoptoosiahelas materjali ja aega selle edastamisest vereringes mida täheldatakse SLE ning teravdab autoimmuunprotsess.
Töö eesmärgiks oli uurida tervete inimeste lümfotsüütide primaarses kultuuris IgG klassi antikehade genotoksilisust natiivsele DNA-le.
Materjalid ja uurimismeetodid
IgG-AT eraldamine inimese seerumiga NDNA-le
IgG-AT eraldamine ja puhastamine nDNA saamiseks seerumitest ning SLE ja RA patsientidest viidi läbi kõikides etappides vastavalt eelnevalt välja töötatud meetodile [4]. Me kasutasime AT naiste vere-seerumi DNA-ga - 20 tervete doonorite seerumit, 7 SLE-i patsienti ja 20 RA-ga seerumi seerumit haiguse ägenemise perioodil, mis saadi Kaasani meditsiiniasutustes. SLE ja RA diagnoosimist tegi GOU DPO kvalifitseeritud reumatoloogid tervise ja sotsiaalse arengu föderaalse agentuuri Kaasani riiklikus meditsiiniakadeeriumis.
Lümfotsüütide valimine tervete inimeste tervest verest viidi läbi vastavalt standardsele meetodile ficoll-verografiini tihedusega 1,077 mg / ml [10].
Lümfotsüütide kasvatamine IgG-AT manulusel nDNA-le
Rakkudele (2 • 10 4 rakku / süvendi kohta) lahjendati täiskeskkonnaga RPMI-1640, pH 7,4 (Gibco, Šotimaa), millele oli lisatud 10% kuumusega inaktiveeritud veise loote seerumit, 2 mM glutamiini ( «Serva», Saksamaa), 100 U / ml penitsilliini (Venemaa), 100 ug / ml streptomütsiini (Venemaa) lisati puhastatud IgG-antikehade dsDNA alafraktsioon kuni lõpliku kontsentratsioonini 1 ug / ml. Iga katset korrati kolm korda. Rakke inkubeeriti temperatuuril 37 ° C, 0,5%2 72 tunni jooksul.
Elujõuliste lümfotsüütide koguarv ja arv pärast isoleerimist kogu verest ja inkubeerimine IgG-AT alfraktsioonidega nDNA-le määrati trypansinise eemaldamise meetodiga.
Rakkude tuumareaktiivse DNA kahjustuse tase pärast IgG-AT alfraktsioonide kasvatamist nDNA-deks määrati fluorestsentspektrofotomeetriliselt, muutes lümfotsüütide EB-DNA kromatiini kompleksi fluorestsentsi intensiivsust [2].
Tuumareenergia kahjustuse taseme määramine üksikute rakkude geel-elektroforeesi meetodil - "komeedid DNA"
PBS-is kasutati 1% madala sulamistemperatuuriga agaroosi (Fermentas, Kanada) lahust. Polülisiiniga (ApexLab, Venemaa) kaetud klaasist slaidile lisati ühtlaselt ja jätkati 30 minutit temperatuuril +20 ° C 60 ui agaroosgeeli koos rakkudega (2 · 10 4 - 5 · 10 4). Rakulüsi (10 mM Tris-HCl, pH 10, 2,5 M NaCl, 100 mM EDTA-Na2, 1% Triton X-100, 5% DMSO, +4 ° C) viidi läbi 1 tund. Prillid viidi seejärel elektroforeesi puhvrisse (300 mM NaOH, 1 mM EDTA-Na2, pH> 13, +4 ° C) ja jäetakse 20 minutiks. Elektroforees viidi läbi 20 minutit 1 V / cm ja 300 mA juures. Lõpuks viidi preparaadid 15 minutit fikseerimise lahusesse (70% etüülalkohol), seejärel kuivatati temperatuuril +20 ° C (1-2 tundi). Positiivse kontrollina DNA degradatsiooni visualiseerimiseks kasutati rakke, mida inkubeeriti 5 minutit -20 ° C juures 100 uM N juuresolekul.2Oh2. Ettevalmistused värviti akridiinoranż (20 pg / ml) 30 minutit ja analüüsiti fluorestsentsmikroskoobiga (mikroskoobi Axioscope A1, «Sarl Zeiss», Saksamaa) koos sobiva filtreid (ergastusfiltri 490 nm, dikroidpeegel 510, katkestusfiltrit 530 nm), suurenemine 40x
Statistiliste andmete töötlemine
Saadud andmetel arvutati EB-DNA rakkude elujõulisuse ja fluorestsentsi intensiivsuse muutused keskmiselt 97,5 ja 2,5 protsentiili kasutades Excel Office 2003 tavapaketti ja lisaks kasutati Dunnet'i kriteeriumit [1].
TEADUSUURINGUTE TULEMUSED JA NENDE ARUTELUD
DNA-hüdrolüüsivate antikehade taseme tõus on täheldatud SLE-is ja RA-s, kuid haiguse kliiniline pilt on erinev [4; 7]. Arvatavasti on IgG-AT nDNA-iga indutseerivad ja osalevad AIZ-i põletikulises protsessis, kuid see, mis määrab nende patogeense potentsiaali ja selle realiseerimise organismis, pole täielikult mõistetav.
Seepärast, et sügavamalt mõista nDNA antikehade rolli autoimmuunse sündroomi esilekutsumisel ja liikumisel, hinnati IgG-AT genotoksilisuse sõltuvust nDNA-le nende füüsikalis-keemiliste ja immunokeemiliste omaduste kohta.
Igast saadi seerum 4 alafraktsioon vaba immuunsüsteemi IgG-AT komplekside dsDNA erineva laengu (fraktsioon I, mida iseloomustab üldine positiivne laeng ja fraktsioonid II, millel on ühine negatiivse laenguga) ja afiinsus dsDNA - alafraktsioon ja elueeritakse dsDNA-tselluloosi puhvris, mis sisaldas 1M NaCl ja b alamfraktsioonides elueeritakse sorbendi puhvris Gly-HCl pH 2,3, mis võimaldab teha eeldusel nende suurem afiinsus antigeeni.
Näidati, et positiivse laenguga IgG-ATi juuresolekul doonori nDNA korral vähendatakse eluvõimeliste lümfotsüütide koguarvu ja arvu võrreldes kontrolliga (PBS) (joonis 1). SLE-ga patsientidel oleva IgG-ATi haiguse ägenemise etapil on doonorite AT sarnane mõju tervete indiviidide lümfotsüütidele, kuid nende toime on rohkem väljendunud, mis on tõenäoliselt tingitud nende kõrgest DNA-hüdrolüüsimisest.
Haiguse ägenemise etapis doonorite ja SLE-i patsientide nDNA-ga sarnase mõju IgG-AT-rakkudele haiguse kliiniliste tunnuste puudumine on seletatav asjaoluga, et tervete inimeste vere IgG-AT ja nDNA tase on oluliselt madalam kui SLE-patsientidel. Lisaks sellele leitakse enamus IgG-AT-i ja nDNA-d tervislike indiviidide veres immuunkompleksides anti-idiotüüpsete antikehadega [4] või negatiivselt laetud biopolümeeridega, millel on DNA-ga sarnane konformatsioon.
Isoleerimisest protsessi IgG-antikehade dsDNA seerumite on hävitamist immuunkomplekse AT-DNA moodustumisel vaba antikehade dsDNA, kuid eksperimendid lümfotsüütidel, me kasutasime samasuguse kontsentratsiooniga test antikehade, saades võimaluse jälgida potentsiaalset negatiivset mõju in vitro AT rakud rahastajad.
Joon. 1. Tervete isikute eluvõimeliste lümfotsüütide koguarv ja arv pärast 72 tundi inkubeerimist 37 ° C juures IgG-AT subfraktsioonide manulusel nDNA-le:
Ia - positiivselt laetud madala afiinsusega IgG-AT kuni nDNA;
IIa - negatiivselt laetud madala afiinsusega IgG-AT kuni nDNA;
IB - positiivselt laetud kõrge afiinsusega IgG-AT kuni nDNA;
IIb - negatiivselt laetud kõrge afiinsusega IgG-AT kuni nDNA.
Tõenäoliselt võib ebanormaalne SCV-AT nDNA-le tekkida naturaalsest AT-st, mis täidab keha kaitsva funktsiooni, kuid küsimus selle ebanormaalse vahetamise põhjuste kohta jääb avatuks.
Selgus, et spektri tsütotoksiliste alamfraktsioonides IgG-antikehade dsDNA seerumis RA-ga patsientide erineb normaalse ja SLE. Koos positiivselt laetud madala afiinsusega antikehad iseloomuliku DNA doonoritel ja patsientidel SLE afiinsusel positiivselt kui ka negatiivselt laetud alafraktsioon IgG-antikehade dsDNA RA patsientidel põhjustada vähendab märgatavalt lümfotsüütide vohamise ja mitmeid elujõulisi tervete indiviidide in vitro.
Lümfotsüütide kromatiini kondensatsiooni muutusi pärast IgG-AT subfraktsioonide kokkupuudet nDNA-ga uuriti fluorestsents-spektrofotomeetriliselt. DNA lünkade moodustumine põhjustab kromatiini dekompaktsiooni, EB-ga seondumiskohtade suurenemist nukleiinhappega ja EB-DNA kompleksi fluorestsentsi suurenemist [2].
Lisaks sellele hinnati IgG-AT genotoksilisust nDNA suhtes komeet-DNA meetodil. Kui DNA-s esineb lünki, on kromatiini struktuuriline struktuur häiritud ja superküllus kaob, mis viib molekulide leevendumiseni. Elektriväljas venitatakse lõdvendatud silmad ja DNA fragmendid anoodi suunas, mis annab vaadeldavatele objektidele komeede välimuse. Kometaalse saba pikkuse ja struktuuri kohaselt saab hinnata rakkude DNA-de lagunemise taset.
Kasv flurestsentsintensiivsusest kompleks DL-DNA proovides inkubeeriti positiivselt laetud-IgG antikehad dsDNA (Ia, Ib) doonorid, näidates rakud kromatiini struktuuri DNA muutus - eemaldades superspiralisatsiooni ja võimaliku tekkimisega katkestusi (tabel 1). Tüüpilises micrographs objektid pärast rakkude inkubeerimist koos positiivse laenguga IgG-antikehade dsDNA moodustumise avastatakse "komeedi saba" (joonis 2B), mis ei ole täheldatud negatiivne kontroll PBS (Joon. 2A) ja on peegeldus geenitoksiliste AT DNA. Tõenäoliselt võivad doonorite mõned DNA-siduvad AT rakkudesse sissetungijad jõuda tuumeni, seostuda DNA-ga ja muuta selle konformatsiooni. Näiteks on näidatud, et AT DNA sidumiskohas oluliselt suurendab selle hävitamist hüdroksüülradikaalidega [8]. Tõenäoliselt AT nDNA-ga edendavad nDNA oksüdatiivset hävitamist, muutes selle struktuuri, muutes restriktsioonisaidid hüdroksüülradikaalidele kättesaadavaks.
Tabel 1 - muutused lümfotsüütide EB-DNA kromatiini fluorestsentsi tasemes pärast 72 tunni inkubeerimist temperatuuril 37 ° C koos IgG-AT subfraktsioonidega nDNA-le
Alamfraktsioonid
IgG-AT kuni nDNA
EB-DNA kompleksi fluorestsentsi intensiivsus, ühikud / rakk
Hulgiskleroosi (MS) probleem on tingitud selle haiguse all kannatavate inimeste aastakasvust. Selle kesknärvisüsteemi väga tõsise haiguse põhjuste, väljaarendamise ja ravimise uurimine on oluline ühe neuroloogilise tava juhtivate kohtade jaoks [5], mis on kaasaegse meditsiini prioriteet. Hulgiskleroos on teadmata etioloogiaga närvisüsteemi kliiniliselt heterogeenne krooniline demüeliniseeriv haigus. Kui MS suurendab IgE erinevate komponentide vastaseid spetsiifilisi antikehi (AT) sisaldavat IgG kontsentratsiooni; tuvastatud DNA-vastased antikehad, antikehad teiste kehade struktuuride ja kudede suhtes [3]. Nende antikehade patogeneetiline ja kliiniline tähtsus ei ole hästi teada. Viimastel aastatel on näidatud, et loodusliku ja denatureeritud DNA antikehad mängivad rolli hulgiskleroosi tekkeks. Nende antikehade esinemise sagedus on haiguse ebasoodsa haigusjuhtumiga patsientidel oluliselt suurem [2] ja see toimub ka dünaamilise vaatluse ajal haiguse aktiivses faasis [1], mis näitab tihedat seost antikehade tootmise ja haiguse peamiste etappide vahel. Antinukleaarsete antikehade tasemed võivad oluliselt erineda, sõltudes mitte ainult patsiendi individuaalsest immunoreaktiivsusest, haiguse olemusest ja staadiumist, vaid ka autoimmuunvastusest nii natiivsele kui denatureeritud DNA-le [1].
MS-iga süveneb hävitavaid protsesse, mis võivad avalduda endogeense mürgistuse kasvu, mida iseloomustab keskmise kaalu molekulide spekter. Need on valgulised ained molekulmassiga 300-5000 daltonit (Da), millega seoses neid nimetatakse sageli keskmise raskusega molekulide (MSM) või keskmise molekulaarse peptiididena (SMP) [6]. MSM on tuntud kui oluline mürgituse universaalne tegur. Psühhiaatrilistel ja neuroloogilistel patsientidel erineva iseloomu seerumis olevate MSMide määramine on informatiivne [7].
Endogeense mürgistuse mittespetsiifilise sündroomi aluseks olevad hävitavad protsessid on reeglina seotud oksüdatiivse stressi aktiveerimisega ja nendega kaasneb membraanide häiritud struktuur ja funktsioon [14]. MSM akumuleerumine ei ole mitte ainult endotoksikatsiooni marker, vaid ka tegur, mis süvendab patoloogilise protsessi kulgu - teiseste toksiinide rolli saamine, nad põhjustavad vere-aju barjääri lagunemist, mikrovõlu, inhibeerivad mitokondriaalse oksüdatsiooni protsesse, häirivad aminohapete transporti [6]. Uuriti peaaegu täielikku oksüdatsiooni ja fosforüleerimise eraldamist, mis näitasid, et MSM-i mõjul toimivad adenüül-nukleotiidide hingamise intensiivsuse reguleerimise mehhanismid. Üks MSM-i neurotoksilise toime võimalikest mehhanismidest on naatrium- ja kaalium ioonide aktiivse transpordi mehhanismi pärssimine läbi kesknärvisüsteemi kudede rakuliste elementide membraani.
Selle uuringu eesmärk oli uurida mitmesuguse hulgikoldekõvastumusega patsientide keskmise massi ja antikehade sageduse molekulide spektrit natiivsele ja denatureeritud DNA-le.
Materjalid ja uurimismeetodid
Diagnostiliste kriteeriumide kasutamine McDonald [12] viis läbi tervikliku kliinilise ja bioloogilise uuringu 65 patsiendil, kellel oli laiendatud skleroos, kellel oli ravi Siberi riikliku meditsiinikõrgkooli (Tomsk) neuroloogia kliinikus või kellel oli ambulatoorne seisund. Laboratoorsete uuringute kontrollrühmaks uuriti 27 praktiliselt terveid isikuid, mis vastavad uuritud patsientide soole ja vanusele. Uuring viidi läbi vastavalt bioeetika standarditele vastavalt kohaliku bioeetikakomitee poolt kinnitatud protokollile. Uuringu ajal oli patsiendi keskmine vanus 35,7 aastat (16-85 aastat), haiguse alguse keskmine vanus oli 29,50 (12-47) aastat ja haiguse kestus oli 10,35 ± 7,19 aastat (1-19 eluaastat) ) Naised moodustasid 61,12% kõigist patsientidest (39 inimest), mehed - 38,88% (23 inimest).
Neuroloogilise defitsiidi raskusastet hinnati vastavalt Kurtzke funktsionaalkaaludele [11], määrates kindlaks neuroloogiliste defektide punktide (FS) ja puude taseme (EDSS) summa. Progressiooni kiiruseks määrati EDSS skoori ja haiguse kestuse suhe, MS-ga patsientidel oli see väärtus 0,79 ± 0,01 (0,25-1,86) (p = 0,002).
39 (58,06%) patsiendil diagnoositi haiguse remissioonitüüp (RRS), 19 (30,62%) - sekundaarne progresseeruv (CDPR), 7 (11,29%) - esmane progresseeruv (CPS).
Laboratoorseteks uuringuteks kasutati patsiendi perifeerse vere seerumit. Endogeense mürgistuse parameetreid hinnati keskmise kaalu molekulide spekter seerumis skriinimismeetodi [8] järgi meie modifikatsioonis [7]. Meetodi põhimõte põhineb kõrge molekulaarse peptiidi ja valgul sisalduva vere seerumi vabanemisel trikloroäädikhappega ja SMP koguse kvantitatiivse määramisega pärast supernatandi vedeliku tsentrifuugimist monokromaatilise valgusvoo abil absorbeerides lainepikkusel 280, 254, 230 nm. Tulemused väljendati optilise neeldumise ühikutes. Lainepikkusel 280 nm (ühik A280) avastatud MSM fraktsioon280, aromaatsete aminohapete sisaldus; 254 nm juures (ühik A254) - MSM fraktsioon254, mis ei sisalda aminohappeid - mittetäieliku proteiini lagunemise tooted, millel on mürgised mõjud; 230 nm juures (ühik A230) - MSM fraktsioon230, nukleiinhappejääkidega seotud.
Seerumi üheahelalise ja kaheahelalise DNA IgG antikehade immunogeensuse määramiseks seerumis kasutati JSC "Vector-Best" (Venemaa) toodetud testiküsimusi "Vekto-ssDNA-IgG" ja "Vekto-dsDNA-IgG". Anti-DNA antikehade suhteline sisaldus uuritavates proovides väljendati optilise neeldumise ühikutes 450 nm juures (ühik A450)
Statistiline analüüs ja andmetöötlus viidi läbi, kasutades Windowsi rakenduste paketi Statistica versiooni 6.0 (StatSoft. Inc., 2001). Erinevuste olulisus määrati õpilase t-testiga ja kasutati sõltumatute proovide jaoks mitteparameetrilist Mann-Whitney test. Erinevused loeti statistiliselt oluliseks saavutatud olulisuse tasemel p 0,05
Uurimismeetod: IHL.
Biomaterjal: veri (seerum).
Denatureeritud DNA antikehad (süsteemne erütematoosluupus) on süsteemse erütematoosluupuse marker.
DNA antikehad jagunevad kaheks peamiseks tüübiks: antikehad, mis reageerivad kaheahelalise (natiivse) DNA-ga (dsDNA) ja antikehad, mis reageerivad üheahelalise (denatureeritud) DNA-ga (ssDNA). DsDNA AT-d on spetsiifilisemad süsteemse erütematoosluupuse (SLE) diagnoosimiseks kui ssDNA-ga seotud AT-d, mis esinevad teiste reumaatiliste haigustega patsientide seerumis ja millel ei ole olulist diagnostilist väärtust.
Denatureeritud DNA antikehad on seotud luupus nefriidi neerukahjustuse patogeneesiga, nii et testut laialdaselt kasutatakse diskoidse luupuse erütematooside diagnoosimiseks.
Eriõpe on vajalik. Soovitatav on võtta verd mitte varem kui 4 tundi pärast viimast söögikorda.
Kaheahelalise DNA antikehad - autoantikehad, mis on suunatud oma kaheahelalise DNA vastu ja mida on täheldatud süsteemse erütematoosluupusega. Uuriti diagnoosida, hinnata aktiivsust ja kontrollida selle haiguse ravi.
Vene sünonüümid
Kaheahelalise DNA antikehad, natiivse DNA antikehad, anti-DNA-d.
Inglise keele sünonüümid
Ds-DNA-vastane antikeha, looduslik kaheahelaline DNA antikeha, anti-DNA, kaheahelaline DNA antikeha.
Uurimismeetod
Ensüüm-seotud immunosorbentanalüüs (ELISA).
Mõõtühikud
RÜ / ml (rahvusvaheline ühik milliliitri kohta).
Millist biomaterjali saab uurimistööks kasutada?
Kuidas õppimiseks valmistuda?
Ärge suitsetage 30 minutit enne vere annetamist.
Uuringu üldine teave
Kaheahelalise DNA antikehad (dsDNA-vastased antikehad) kuuluvad antinukleaarsete antikehade rühma, see tähendab, auto antikehad, mille keha on suunatud omaenda tuumikomponentide komponentide poolt. Kuigi antinukleaarsed antikehad on iseloomulikud hajutatud sidekoehaiguste rühma paljudele haigustele, peetakse süsteemset erütematoosluupust (SLE) spetsiifilist anti-dsDNA-d. Anti-dsDNA tuvastamine on üks "SLE" diagnoosimise kriteeriumidest.
Anti-dsDNA saab tuvastada ensüümi immuunanalüüsiga. Väikese koguse antikehade proovide uurimisel on vajalik seda testitud tundlikkus (umbes 100%). Arvestades seda, et patsientide seerumis süsteemse sidekoe haigused samal ajal võib olla mitmeid sorte autoantikehad, ning asjaolu, et sageli eristusdiagnoosis nende haiguste põhineb täpselt identifitseerimise kohta mingit kindlat tüüpi antikeha, valik laborikatsete on äärmiselt oluline võtta arvesse kõrge spetsiifilisus. DsDNA-vastase antikeha spetsiifilisus on 99,2%, mis muudab selle uuringu SLE diferentsiaaldiagnostikas asendamatuks.
Anti-dsDNA tuvastatakse 50-70% -l patsientidest diagnoosi "SLE" ajal. Usutakse, et immuunsüsteemi koosnevaid komplekse kaheahelaline DNA ja neile spetsiifilisi antikehi (immunoglobuliinide IgG ja IgM), on kaasatud arengu ja põhjustada mikrovaskulitov iseloomulikud sümptomid SLE vormis nahakahjustus, neeru-, liigesed ja paljud teised organitesse. DsDNA-vastane antikeha on SLE-le nii tüüpiline, et see võimaldab teil seda haigust diagnoosida isegi negatiivse sõeluuringuga antinukleaarsete antikehade puhul. Siiski tuleb märkida, et anti-dsDNA puudumine ei välista SLE olemasolu.
Tuvastamine anti-dsDNA patsientidel ilma kliiniliste sümptomiteta ja muude kriteeriumide haigust ei ravita kasuks diagnoosi "SLE", kuid need patsiendid on oht SLE tulevikus ja mida tuleb järgida ajal reumatoloog, nagu tekkimist anti-dsDNA võib eelneda välimus haigused juba mitu aastat.
Anti-dsDNA kontsentratsioon varieerub sõltuvalt haiguse kulgu iseloomust. Reeglina näitab kõrge indeks kõrge SLE aktiivsust ja väike näitab haiguse remissiooni. Seetõttu kasutatakse haiguse ravi ja prognoosi jälgimiseks anti-dsDNA kontsentratsiooni mõõtmist. Kontsentratsiooni suurenemine viitab haiguse ebapiisavale kontrollimisele, selle progressioonile ja lupus-nefriidi võimalusele. Vastupidi, püsivalt madal antikehade kontsentratsioon on hea prognostiline märk. Tuleb märkida, et seda sõltuvust ei järgita kõigil juhtudel. Anti-dsDNA-d mõõdetakse regulaarselt, iga 3-6 kuu järel, vähese raskusega SLE-ga ning lühemate intervallidega, kui haigus puudub, ravi valikul raseduse või sünnitusjärgse perioodi jooksul.
Spetsiifiline kliiniline sündroom on ravim lupus. Vaatamata väga sarnased kliinilise pildi seisundi SLE, narkootikumide luupus on mitmeid erinevusi: provotseerib tarbimist ravimid (prokaiinamiidiga hüdraiasiin, propüültioeratsiil kloorpromasiinvesinikkloriidi, liitium, jne) Ja läbib täielikult pärast nende kõrvaldamist, harva kaasata siseorganid ja seetõttu on soodsa prognoosimisega ning vähem tihedalt koos anti-dsDNA esinemisega. Seega, kui negatiivne dsDNA-analüüsi tulemus patsiendil, kellel on autoimmuunse luupuse kliinilised tunnused ja antinuclear faktori olemasolu, tuleks välistada ravimi valupus.
Hoolimata asjaolust, et SLE-le on iseloomulik kõrge dsDNA-d, on nende madal kontsentratsioon ka patsientide veres ja mõningate teiste hajutatud sidekoehaiguste (Sjogreni sündroom, sidekoe haigus) seostamisel. Lisaks võib test olla positiivne patsientidele, kellel on krooniline B- ja C-hepatiit, primaarne biliaarne tsirroos ja nakkuslik mononukleoos.
SLE-i autoantikehade spekter sisaldab ka muid antinukleaarseid (anti-Sm, RNP, SS-A, SS-B), antiplasma ja fosfolipiidvastaseid antikehi. Samuti aitab diagnoosi tegemisel leida nende patsientide seerum, kellel on kliinilised sümptomid SLE ja anti-dsDNA-vastased ained. Lisaks sellele peaks dsDNA-d sisaldava kontsentratsiooni määramiseks lisama mõned üldised kliinilised analüüsid.
Mis on teadustöö?
Millal on plaanitud uuring?
Mida tulemused tähendavad?
Kontsentratsioon: 0... 25 RÜ / ml.
Mis võib tulemust mõjutada?
Olulised märkused
Samuti soovitatav
Kes teeb uuringu?
Reumatoloog, dermatovenereologist, nefroloog, üldarst.
Kirjandus
Jäta oma e-kiri ja saate uudiseid, samuti KDLmedi labori eksklusiivseid pakkumisi