Analüüsi teostamine PCR abil: protseduuri kirjeldus

Dieedid

Polümeraasi ahelreaktsioon on teada 30 aastat. Seda kasutatakse laialdaselt paljudes valdkondades, alates arheoloogia ja geneetika.

See on PCR-meetod, mis aitab luua isadust, kuid seda kasutatakse sageli inimeste organismi erinevate nakkushaiguste tuvastamiseks.

Kuidas PCR-analüüs läbi viiakse ja mis see on? Püüame neile küsimustele üksikasjalikult vastata.

PCR analüüs - mis see on?

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on molekulaarse geneetilise diagnostika kõrge täpsusega meetod, mis võimaldab tuvastada inimestel mitmesuguseid nakkushaigusi ja pärilikke haigusi nii akuutses kui ka kroonilises staadiumis ning juba ammu enne haiguse ilmnemist.

PCR-meetod on täiesti spetsiifiline ja korrektne, ei saa anda valepositiivseid tulemusi. See tähendab, et kui infektsiooni ei esine, ei näita analüüs kunagi seda, mis see on. Seepärast on diagnoosimise heakskiitmine sageli sageli põhjustav toimeaine ja selle laadi kindlakstegemiseks täiendav PCR-analüüs.

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) 1983. aastal, välja töötanud Carey Mulllis (USA), kellele 1993. aastal sai ta Nobeli preemia keemias.

Mis on selle meetodi eelis?

Selle meetodiga diagnoosimine võimaldab leida patogeeni otseselt uuritavates materjalides sisalduvas geenis. See on kõige täpsem analüüs suguelundite infektsioonide, varjatud nakkuste, erinevate sugulisel teel levivate haiguste kohta.

Erinevused PCR-diagnostika muudest laboriuuringute meetoditest on järgmised:

  • selle meetodi eesmärk on identifitseerida patogeen ise;
  • PCR-diagnostika eristatakse nende mitmekülgsuse tõttu: mitmete patogeenide tuvastamiseks;
  • haigused on piisav ainult patsiendi bioloogiline proov;
  • meetod on väga tundlik ja sellega ei kaasne muid ristreaktsioone.

Lisaks on PCR-i diagnostika eeliseks see, et patsiendi bioloogiline materjal sobib analüüsiks: vere, genitaalide, uriini, sperma väljutamise.

Milliseid infektsioone saab PCR-i abil tuvastada?

Organismis võib esineda suur hulk patogeene, sealhulgas "peidetud", mis ei avaldu pikka aega.

PCR-i rasvaanalüüs võimaldab selliste nakkuste avastamist:

PCR-i katsematerjaliks on tavaliselt röga, sülg, urine ja veri. Enne analüüsimist peate hoolikalt selle ette valmistama, olles eelnevalt konsulteerinud arstiga.

PCR-i vereeritakse tavaliselt tühja kõhuga. Hea tulemused näitavad analüüsi, kui uuringu materjal võetakse emakakaelasest või kusejõust. Sellisel juhul on parim PCR-diagnostika viimine hiljemalt üks päev pärast vahekorda.

PCR-sordid

PCR-i kasutatakse paljudes valdkondades analüüsimiseks ja teaduslikes katsetes. On olemas erinevad analüüsimeetodid:

  1. PNR-ga (pöördtranskriptsiooniga PCR, RT-PCR (inglise keeles)) kasutatakse RNA raamatukogust teadaoleva järjestuse amplifitseerimiseks, isoleerimiseks või identifitseerimiseks.
  2. Inverteeritud PCR (Inverse PCR (Eng.)) - kasutatakse, kui soovitud järjestuses on teada ainult väike osa. See meetod on eriti kasulik, kui on vaja kindlaks määrata naaberjärjestused pärast DNA sisestamist genoomi.
  3. Liigendatud PCR-i (lestatud PCR) abil kasutatakse kõrvalsaaduste reaktsioonide arvu vähendamiseks. Kasutatakse kahte paari praimereid ja tehakse kaks järjestikust reaktsiooni.
  4. Asümmeetriline PCR (Asymmetric PCR) viiakse läbi, kui on vaja põhiliselt ühe originaalse DNA ahela võimendamist. Kasutatakse mõnes järjestuse ja hübridiseerimise katsetes.
  5. Kvantitatiivne PCR (kvantitatiivne PCR, Q-PCR (Eng.)) Või reaalajaline PCR-i kasutatakse, et otseselt jälgida konkreetse PCR-produkti koguse mõõtmist igas reaktsioonitsüklis.
  6. Samm PCR (Touchdown PCR (Eng.)) - selle lähenemisviisi kasutamine vähendab praimerite mittespetsiifilise seondumise mõju.
  7. Kontsernispetsiifiline PCR (rühm-spetsiifiline PCR) - PCR seotud seotud järjestuste jaoks ühe või eri liikide vahel, kasutades nende järjestuste jaoks konservatiivseid praimereid.

Kui maatriksi nukleotiidjärjestus on osaliselt või teadmata, on võimalik kasutada degenereeruvaid praimereid, mille järjestus sisaldab degenereerunud positsioone, milles võib asuda mis tahes alused. Näiteks võib praimerjärjestus olla:... ATH..., kus H on A, T või C.

Milliseid bioloogilisi materjale uuritakse?

PCR-uuringute materjal, milles võib tuvastada võõraste bakteriaalsete DNA-de või viiruse DNA või RNA, võib koosneda erinevast bioloogilisest keskkonnast ja inimese vedelikest:

  1. Uriin Seda saab kasutada urogenitaaltrakti nakatamiseks meestel ja kuseteede organitel naistel (meeste puhul kasutatakse uriini materjalina, mis asendab epiteeli kaabitsa).
  2. Flegm. Seda kasutatakse tuberkuloosi diagnoosimiseks ja harvemini klamüüdia ja mükoplasmoosi hingamisteede diagnoosimiseks. Röga koguses 15-20 ml kogutakse steriilses (ühekordseks kasutamiseks) pudelis.
  3. Bioloogilised vedelikud. Eesnäärme mahl, pleura, tserebrospinaalne, amnion, liigesevedelik, bronhoalveolaarne lava, sülg kogutakse vastavalt näidustustele.
  4. Limaskestade epiteliaalsed sabastused. Tavaliselt kasutatakse sugulisel teel levivate haiguste (STL) diagnoosimiseks, nagu näiteks gonorröa, klamüüdia, mükoplasmoos, ureaplasmoos, trikhomoniaas, gardnerelleis, herpeedilised ja muud limaskestad mõjutavad infektsioonid.
  5. Biopsia. Kõige sagedamini kasutatavad mao ja kaksteistsõrmiksoole biopsia Helicobacter pylori nakkuse tuvastamiseks.
  6. Veri, plasma, seerum. Kasutatakse B, C, D, G viiruste, herpese, CMV, HIV, inimese geenide PCR analüüsiks.

Kuidas analüüsiks valmistuda?

PCR-i tulemuse usaldusväärsus sõltub otseselt uuritava materjali tarnimise õigsusest. Materjal ei tohiks olla saastunud, vastasel juhul ei ole uuringu tulemus objektiivne. Enne PCR analüüsi esitamist on kõige olulisemad soovitused järgmised nõuded:

  1. Uriin viiakse hommikul steriilsesse anumasse.
  2. Hommikust tuleb võtta tühja kõhuga infektsiooni vereproov.
  3. Seksuaalset tegevust pole vaja analüüside tegemisele eelnenud päeval näidata.

Analüüsi tulemus on valmis 1,5-2 päeva pärast protseduuri. On olukordi, kus tulemust saab koostada samal päeval.

CRP analüüsi dekodeerimine

Esitatud uurimistöö tõlgendamise protsess eristub selle lihtsusest. PCR analüüsi tulemusi saab saada 1,5-2x päeval pärast materjali tarnimist. Mõnel juhul on tulemus juba esimesel päeval valmis ja see võib tähendada:

  • Negatiivne tulemus näitab, et diagnoositavas materjalis puuduvad nakkushaigused.
  • Pcr positiivne tähendab, et patogeenide DNA või RNA esineb inimkehas.

Mõnel juhul annake mikroorganismide kvantitatiivset määramist. See kehtib eriti tingitult patogeensete mikroorganismide põhjustatud haiguste puhul. Kuna need bakterid avaldavad negatiivset mõju ainult ülemääraste koguste korral.

Samuti on PCR-i kvantitatiivne analüüs terapeutiliste taktikute valikul ja viiruslike infektsioonide nagu HIV ja hepatiidi viiruste raviks.

Kui täpselt on infektsioonide PCR-diagnoos?

PCR-meetod eristub suure täpsuse, spetsiifilisuse ja tundlikkusega. See tähendab, et see analüüs on võimeline:

  • täpselt kindlaks määrata nakkuse olemasolu või puudumine;
  • täpselt täpsustada, millist infektsiooni (spetsiifilisust);
  • avastada infektsioon isegi bioloogilises materjalis mikroobide DNA-ga väga väikestes kogustes
  • mis on uuritud (tundlikkus).

PCR analüüs: hind ja kellaaeg

Konkreetse analüüsi hind sõltub sellest, millist infektsiooni olete kontrollinud. Ligikaudsed hinnad ja tingimused:

  1. STI: 300-500 rubla, aeg - 1 päev;
  2. Epsteini-Barri viirus, inimese papilloomiviirus, herpes, tsütomegaloviirus: 300-500 rubla, aeg - 1 päev;
  3. Hepatiit A, B, C, D, G: kvalitatiivne analüüs 650 rubla, kvantitatiivne analüüs 2000 rubla. Tingimused - kuni 5 päeva;
  4. Hepatiit C viiruse antikehad, kokku (anti-HCV) - 420 rubla;
  5. Hepatiit C viiruse antikehad, IgM (anti-HCV IgM) - 420 rubla;
  6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 rubla, tähtajad - 1 päev;
  7. HIV (antikehad ja antigeenid) - 380 rubla;
  8. HIV RNA, kvalitatiivselt - 3500 rubla;
  9. HIV RNA, kvantitatiivselt - 11 000 rubla.

Raha säästmiseks võite valida fikseeritud analüüsipartii. Seda teenust osutab suurem osa kliinikutest, kus analüüsi on võimalik edastada ERP-meetodiga (invitro, onkleinikumid jne).

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) - spetsiifiliste patogeenide täpse avastamise meetod

Polümeraasi ahelreaktsioon (PCR) on täpne meetod pärilike patoloogiate, nakkuste, viiruslike haiguste diagnoosimisel mis tahes etapis (äge või krooniline), samuti - varases staadiumis kuni haiguse selgete ilmnemiseni, identifitseerides haigusetekitajaid, tuginedes nende DNA-le, RNA mis on geneetilise materjalina patsiendilt saadud proovides. Ja täna räägime polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) meetodite olemusest, diagnoosimise etappidest ja põhimõtetest ning selle maksumusest.

Mis on polümeraasi ahelreaktsioon?

Analüüsi alus - amplifikatsioon (kahekordistamine) - DNA fragmendi (deoksüribonukleiinhape) mitme koopia loomine, mis esindab inimese geneetilist kompleksi. Uuringuks on vajalik väga väike kogus füsioloogilist ainet (röga, väljaheited, epiteeli kaapimine, eesnäärme mahl, veri, sperma, amniootiline vedelik, lima, platsenta kude, uriin, sülg, pleura vedelik, tserebrospinaalvedelik). Sellisel juhul võib näiteks patsiendi urogenitaaltraktis tuvastada isegi ühe kahjuliku mikrooba.

  • infektsioonide varajases diagnoosimisel, geneetilised, onkoloogilised patoloogiad;
  • kohtuekspertiisi arstlikul läbivaatusel, kui uurimistööks on olemas väga väike kogus DNA-d;
  • veterinaaria, farmaatsiatooted, bioloogia, molekulaargeneetika;
  • DNA isikutuvastuseks, isaduse kinnitamine;
  • paleontoloogias, antropoloogias, ökoloogias (toodete kvaliteedi jälgimisel, keskkonnateguritel).

See on polümeraasi ahelreaktsioon, kirjeldab üksikasjalikult seda videot:

Kellele see on määratud

Polümeraasi ahelreaktsioon nakkushaiguste diagnoosimisel on üks kõige usaldusväärsemaid spetsiifilise täpsuse ja usaldusväärsuse meetodeid. Näiteks klamüüdia ja paljude teiste patogeenide PCR-i analüüsi täpsus on 100% (absoluutne). Kõige sagedamini on polümeraasi ahelreaktsiooni protseduur ette nähtud patsientidele, kellel diagnoosimisel on raskusi konkreetse patogeeni tuvastamisega.

Laboratoorset katset PCR kasutatakse:

  • et avastada patogeensed organismid, mis põhjustavad kuseteede ja suguelundite nakkust, mida põllukultuuride või immunoloogiliste meetodite kasutamisel on raske kindlaks teha;
  • HIV-i uuesti diagnoosimiseks esialgses etapis positiivse, kuid kahtlase primaaranalüüsi tulemuse korral (näiteks AIDS-i nakatunud vanemate vastsündinutel);
  • luua varajases staadiumis onkoloogiline haigus (onkogeenide mutatsioonide uurimine) ja konkreetse patsiendi ravirežiimi individuaalne korrigeerimine;
  • pärilike patoloogiate varajase avastamise ja võimaliku ravimise eesmärgil.

Seega tulevad vanemad analüüsida, kas nad on geneetilise patoloogia kandjad, lastel määrab PCR päriliku haigusega kokkupuute tõenäosuse.

  • varase rasedusaegse loote häirete tuvastamiseks (kasvava embrüo üksikute rakkude uurimine võimalike mutatsioonide kohta);
  • enne elundi siirdamist patsientidel - "koetüpiseerimine" (koe sobivuse kindlakstegemine);
  • tuvastama doonorvere ohtlikke patogeene;
  • vastsündinutel - varjatud nakkuste tuvastamiseks;
  • viirusevastase ja antimikroobse ravi tulemuste hindamiseks.

Miks seda menetlust läbi viia

Kuna PCR on väga efektiivne diagnostiline meetod, mis annab peaaegu 100% tulemusi, kasutatakse protseduuri:

  • lõpliku diagnoosi kinnitama või välistama;
  • ravi tõhususe kiire hindamine.

Paljudel juhtudel on PCR ainus võimalik test areneva haiguse avastamiseks, kui muud bakterioloogilised, immunoloogilised ja viroloogilised diagnostika meetodid on kasutud.

  • Viirused tuvastatakse PCR-protseduuri abil kohe pärast nakatumist ja ilmnevad haiguse tunnused. Viiruse varane avastamine võimaldab teil ravi kiiresti välja kirjutada.
  • Nn nn viiruskoormus (või - viiruste arv keha sees) määratakse kindlaks ka DNA kvantitatiivse analüüsi abil.
  • Spetsiifilised haigusi põhjustavad organismid (näiteks Koch tuberculosis bacillus) on keerukad ja kultiveeritavad liiga kaua. PCR-analüüs võimaldab teil kiiresti kindlaks teha minimaalse hulga patogeene (elus ja surnud) teadusuuringutes sobivates proovides.

Kasutatakse patogeeni üksikasjalikku DNA analüüsi:

  • et määrata kindlaks selle tundlikkus teatud tüüpi antibiootikumide suhtes, mis võimaldab teil koheselt ravi alustada;
  • kontrollida epideemiate levikut kodu- ja metsloomade seas;
  • tuvastada ja jälgida uusi nakkuslikke mikroobide liike ja patogeeni alamtüüpe, mis on esile kutsunud varasemaid epideemiaid.

Diagnostika tüübid

Standardmeetod

Polümeraasi ahelreaktsiooni analüüs viiakse läbi konkreetse DNA ja RNA fragmendi mitmekordse amplifitseerimise (kahekordistamise) alusel, kasutades spetsiifilisi praimer-ensüüme. Kopeerimisahela tulemusena saadakse materjali kogus, mis on uuringuks piisav.

Protseduuri ajal kopeeritakse ainult vajalik fragment (vastab kindlaksmääratud eritingimustele) ja kui see on proovis tegelikult olemas.

Selle PCR-i läbimise kohta selgitab see üksikasjalik video kasulike skeemidega:

Muud meetodid

  • Reaalajaline PCR. Sellises uuringus käivitatakse antud DNA fragmendi identifitseerimise protsess pärast iga tsükli läbimist, mitte pärast 30-40 tsükli kogu ahela rakendamist. Seda tüüpi uuringud võimaldavad saada teavet patogeeni (viirus või mikroob) kogusest organismis, st kvantitatiivse analüüsi läbiviimiseks.
  • RT-PCR (pöördtranskriptsiooni režiim). Seda analüüsi kasutatakse üheahelalise RNA leidmiseks selliste viiruste avastamiseks, mille geneetiline alus on RNA (näiteks C-hepatiidi viirus, immuunpuudulikkus). Selles uuringus kasutatakse spetsiifilist ensüümi pöördtranskriptaasi ja spetsiifilist praimerit ning üheahelaline DNA põhineb RNA-il. Seejärel saadakse sellest ahelast teine ​​DNA ahel ja viiakse läbi standardne protseduur.

Näidustused

PCR-protseduuri kasutatakse nakkushaiguste, neonatoloogia, sünnitusabi, pediaatria, uroloogia, günekoloogia, venereoloogia, neuroloogia, nefroloogia, oftalmoloogia kliinikus.

Analüüsi eesmärgid:

  • geneetiliste kõrvalekallete arengu riski selgitamine lapsega, kellel on pärilike patoloogiate tõenäosus;
  • mõlema vanema diagnoosimine raseduse planeerimisel või ema raske seisundi ajal raseduse ajal;
  • raskused rasestumisel, viljatuse põhjuste väljaselgitamine;
  • suguelundite infektsioonide kahtlus ägedas faasis ja nende kroonilise ülemineku sümptomid;
  • teadmata päritolu põletikuliste protsesside põhjuste tuvastamine;
  • kaitsmata juhuslik ja alaline sugu;
  • patogeeni tundlikkuse kindlaksmääramine konkreetsete antibiootikumide suhtes;
  • haigusetekitajate tuvastamiseks enne ilmse sümptomite ilmnemist (prekliiniline diagnoos), kellel on latentne infektsioon;
  • patsiendid haiguse taastumise kinnitamiseks (retrospektiivne diagnoos);

Diagnostikat kasutatakse ka siis, kui on vaja järgmiste patogeenide täpset tuvastamist:

  • hepatiidi viirused (A B C G), inimese immuunpuudulikkus, tsütomegaloviirus;
  • koolera vibrio;
  • herpes simplex viirus, herpeediivsed liigid;
  • retro-adeno- ja rinoviirused;
  • rubella viirused, Epstein-Barr, tuulerõuged (Zoster-viirus);
  • parvo - ja pikornoviirused;
  • papilloomiviirus;
  • onkogeensed viirused;
  • Helicobacter pylori;
  • legionella, patogeenset tüüpi soolepulgad;
  • Staphylococcus aureus;
  • meningiidi tekitaja;
  • klostriidumid, difteeria ja hemofiilide bakterid;

Kasutatakse infektsioonide määramiseks:

  • nakkuslik mononukleoos;
  • borrelioos, listerioos, puukentsefaliit;
  • Candida kandidoos;
  • suguelundite infektsioonid - trikhomoniaas, ureaplasmoos, kahvatu treponema, gardnerellez, gonorröa, mükoplasmoos, klamüüdia;
  • tuberkuloos.

Vastunäidustused

Kuna protseduuri viiakse läbi mitte patsiendil, ilma organismi mõjutamata, vaid uuringu jaoks võetud bioloogilise materjaliga, pole potentsiaalse ohu puudumise tõttu PCR-i vastunäidustusi.

Siiski ei tehta pärast kolposkoopiaprotseduuri emaka emakakaela kanalitest biomaterjalist proovide võtmist. Määrdeainete, analüüside järeltöötlus on lubatud ainult 4-6 päeva pärast menstruatsiooni lõppu ja tühjakslaadimise lõpetamine.

Kas meetod on ohutu?

Ei ole võimalik negatiivset mõju patsiendile biomaterjali isoleeritud uuringuga laboris.

Protsessi ettevalmistamine (bioloogiliste ainete kohaletoimetamine analüüsiks)

PCR-analüüsi proovina, milles tuvastatakse võõra patogeeni DNA, kasutatakse bioloogilist vedelikku, kudesid, keha eritusi. Testaine manustatakse vereproovi võtmisel veenist, kraapides kõri, ninaõõnde, kusejuhi, pleura õõnde, emakakaela.

Enne diagnostilist protseduuri selgitab arst patsiendile, millist materjali võetakse:

  1. Suguelundite infektsioonide uurimisel on genitaalidest, uriinist ja urineerimisjäljast saadud sekretsiooni kogumine.
  2. Analüüsimiseks võetakse herpes-nakkuste analüüsimisel tsütomegaloviirust, mononukleoose, uriini, kurgu tampooni, hepatiiti, toksoplasmoosi - verest verd.
  3. Erinevate närvisüsteemi kahjustuste diagnoosimiseks võetakse tserebrospinaalvedelikku.
  4. Pulmonoloogias on analüüsiks võetud proovid röga ja pleura vedelik.
  5. Lootele kandmisel uurides võimalike emakasisese infektsiooni, analüüsimiseks kasutatakse amnionivedelikku ja platsentaare rakke.

Pädev ettevalmistus biomaterjali tarnimiseks ei paku patsientidele raskusi. On teatud soovitusi:

  • sugulisel teel levivate nakkuste analüüsimisel:
    • välistama intiimne kokkupuude 72 tundi enne materjali tarnimist;
    • lõpetage vaginaalsete toodete kasutamine 3 päeva jooksul;
    • eelmise päeva õhtust mitte uuritud piirkonna hügieeni läbiviimiseks;
    • välja arvatud urineerimine 3-4 tunni jooksul, kui proov võetakse uuretist;
  • lõpetage antibiootikumide võtmine kuus enne infektsioonide katseid;
  • verd võetakse hommikul enne söömist ja joomist;
  • Esmakordse osa uriinist kogumine toimub põhjalikult intiimse tualeti steriilses anumas.

Kuidas diagnoosi viiakse läbi polümeraasi ahelreaktsiooni meetodil, vt allpool.

Kuidas toimub menetlus?

PCR-uuringu läbiviimisel korratakse teatud tsüklit reaktoris (võimendi või termotsükler) aeg-ajalt:

  1. Esimene samm on denatureerimine. Sülg, veri, biopsia, günekoloogilised testid, röga, kus kahtlustatakse patogeeni DNA (või RNA) esinemist, asetatakse võimendisse, kus materjali kuumutatakse ja DNA jagatakse kahte erinevatesse ahelatesse.
  2. Teine etapp on anniilimine või materjali kerget jahutamist ja praimerite lisamist sellele, mis on võimelised tuvastama DNA molekulis soovitud alasid ja seonduma nendega.
  3. Kolmas samm, pikenemine toimub pärast seda, kui kaks DNA-ahelaga on kinnitatud 2 praimerit. Protsessi kestel on tekkinud patogeeni DNA fragment ja moodustub selle eksemplar.

Need tsüklid korduvad kui "ahelreaktsioonid", mis igal üksikjuhul põhjustavad spetsiifilise DNA fragmendi koopiate kahekordistamist (näiteks segment, kus spetsiifiline viirus on programmeeritud). Mõne tunni jooksul moodustuvad DNA fragmendi mitu eksemplari ja tuvastatakse nende esinemine proovis. Seejärel viiakse tulemuste analüüs ja võrdlemine eri tüüpi patogeenide andmebaasiga infektsiooni tüübi kindlaksmääramiseks.

Teave dekodeerimise tulemuste ja väljundi kohta, mis põhinevad PCR-i reaktsioonil, vt allpool.

Dekodeerimise tulemused

Uuringu lõpptulemus väljastatakse 1-2 päeva pärast bioloogilise materjali tarnimist. Sageli - esimestel päevadel pärast analüüsi.

Kvalitatiivne analüüs

  • Negatiivne tulemus tähendab, et uuritavas ainete osas ei leitud nakkusohtlike ainete jälgi.
  • Positiivne tulemus tähendab patogeensete viiruste või bakterite identifitseerimist bioloogilises proovis väga suure täpsusega materjali kohaletoimetamise ajal.

Kui tulemus on positiivne, kuid nakkuse aktiveerimise märke ei ole tuvastatud, on selle organismi seisundit nimetanud asümptomaatiline "tervislik kandja". Kõige sagedamini täheldatakse biomaterjalide võtmist konkreetsest kohast (emakakaela kanal, kuse- ja suuõõne) viirushaigustest. Sellisel juhul ei ole ravi vaja, kuid pidev arstlik järelevalve on vajalik, kuna on olemas võimalus:

  • viiruse levikust kandjatest ja tervislike inimeste nakatumisest;
  • protsessi aktiveerimine ja haiguse üleminek krooniliseks vormiks.

Kvantitatiivne analüüs

Kvantitatiivse tulemuse määrab konkreetse infektsiooni tüüp spetsiifiline isik. Selle põhjal on võimalik hinnata arengutaset, haiguse staadiumi, mis võimaldab õige ravi koheselt välja kirjutada.

Keskmine maksumus

Polümeraasi ahelreaktsiooni läbiviimise hinnad määravad kindlaks uuringu liigi, patogeeni identifitseerimise raskused, bioloogilise materjali võtmise raskused, analüüsi tüüp (kvalitatiivne või kvantitatiivne), hinnatase laboris.

Teisest küljest, PCR-uuringus saab ühe analüüsitava materjali kogumisel korraga tuvastada mitmeid patogeene. See võimaldab teil salvestada muid laborikatseid.

Ligikaudu PCR analüüsi kulud rublades:

  • gonokokk, gardnerella, trichomonad vaginalis - 180-aastaselt
  • Chlamydia trachomatis - alates 190
  • papilloomiviirus - 380-500
  • uro-genitaaltrakti biotsütoos naistel (mikrofloora kvantitatiivne ja kvalitatiivne hindamine) - 800-lt.

Veel kasulikumat teavet PCR-uuringu kohta leiate allolevast videost:

PCR analüüs - mis see on: kuidas ja kust edasi anda

Need, kes on huvitatud uutest diagnostikameetoditest, peaksid õppima, milline on PCR-meetod. Laboratoorsete uuringute valdkonna tänapäevane tehniline võimekus annab võimaluse tuvastada paljud haigused esialgsetes etappides. Polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) peetakse praegu kõige täpsemate ja uute meetoditena.

PCR analüüs

PCR analüüs - mis see on? See meetod kasutab molekulaarbioloogia põhimõtteid. Materjali uurimiseks kasutati spetsiifilisi ensüüme, mis korduvalt ja kiiresti kopeerivad DNA, patogeenide RNA fragmendid. Olenevalt uuritud materjalist (vere, uriin, väljaheited jne) sõltuvad erinevad PCR-analüüsid. Pärast töötlemist võrreldakse laboratooriumis saadud tulemustega andmebaasi, määrab kindlaks kontsentratsiooni, patogeeni tüübi.

PCR-i analüüs pannakse spetsiaalsesse amplifikaatorisse (seade), mis soojendab ja jahutab tuubid biomaterjaliga. Fragmendi replikatsiooni jaoks on vaja temperatuuri muutusi. Tulemuse täpsus sõltub temperatuuri režiimi täpsusest. Polümeraasi ahelreaktsiooni meetod aitab tuvastada:

  • nakkuslik mononukleoos;
  • HIV;
  • tsütomegaloviiruse infektsioon;
  • viirushepatiit G, C, B, A;
  • sugulisel teel levivad nakkused / haigused (STI / suguhaigused): garderelloos, trikhomoniaas, ureaplasmoos;
  • herpese infektsioon;
  • onkogeensed viirused;
  • listerioos;
  • Helicobacter pylori infektsioon;
  • puukentsefaliit, borrelioos;
  • tuberkuloos;
  • kandidoos

Veri

Tehnoloogia uudsuse tõttu on praegu vereanalüüs PCR-meetodil endiselt kõrge hind. Biomaterjali valmistamiseks ei pea vastama teatavatele nõuetele. Isegi füüsilise koormuse, stressi ja dieedi muutuste tõttu tekkivad muutused ei mõjuta uuringu tulemust. PCR-vereanalüüs võib rikkuda ainult antibakteriaalsete ainete sissevõtmist, mistõttu on vajalik enne ravi läbimist pausi püsida ravi ja testi vahel.

PCR-i vereanalüüsid on kõige levinum viis krooniliste, ägedate nakkuslike patoloogiate diagnoosimiseks viirus- või ebatüüpiliste ilmingute korral. Seroloogilistele uurimismeetoditele on teatavaid raskusi läbi viia - patogeeni olemasolu kindlaksmääramine toimub antikehade olemasolul inimkehas. Tulemus võib olla vale negatiivne, kui patsiendi seisund ei andnud aega nende tootmiseks.

Smear

Günekoloogia valdkonnas kasutatakse nakkavate mikroorganismide olemasolu uurimiseks emarja PCR-i. Materjaliga töötamine toimub samadel põhimõtetel nagu veres: patogeeni DNA fragmentide mitmekordne suurendamine, et seda hõlpsalt identifitseerida. Samuti aitab see tuvastada naiste peidetud nakkusi. Analüüsiks võib võtta erinevaid bioloogilisi vedelikke: sülg, röga, uriin ja veri. Günekoloogias kasutatakse tihti täpsuse kindlaksmääramiseks tupe limaskesta emakakaelaversioonist tampooni.

PCR-i jaoks on olemas teatud näidustused. Antibiootikumide suhtes resistentsete patogeenide tüübi määramiseks on sageli vaja teha seda. Naistel on selle meetodi diagnoosimiseks peamised näited:

  • rasedus, mis on raske;
  • STI akuutne faas;
  • kui on olemas kahtlus STI üleminekule kroonilises staadiumis;
  • viljatuse põhjuste otsimine.

Infektsiooni tuvastamiseks võib määrata arstlik PCR-i väljaheidete analüüs. Selleks, et pärast testi kõige usaldusväärsemaid tulemusi saada, peate enne biomaterjali kogumist järgima järgmisi reegleid:

  • mitmeks päevaks lahustuvate ravimite võtmise lõpetamiseks: õli, ravimküünlad;
  • välja arvatud ravimid, mis annavad erituvat värvi väljaheitega, näiteks rauasisaldusega.

Tara jaoks peaks kasutama steriilset paelu ja anumat. Midagi täiendavalt pühkige neid, loputage pole vaja. Materjalide kogumisel olge ettevaatlik, ärge puudutage käsiseadiste siseseinu. Veenduge, et väljaheide ei olnud uriini lisanditeta, ei saa te fekaalide (enema) jaoks lisatoetusi kasutada. Materjali tuleb koguda tarnepäeval, piisab 1/3 mahuti mahust. Sellel diagnostilisel meetodil on järgmised eelised:

  1. Analüüs võib näidata parasiidi DNA-d, samas kui teised testid võimaldavad tuvastada vaid nende elutähtsate toimete jääke.
  2. Suure täpsusega luuakse patogeen.
  3. Ultra tundlik analüüs, mis võimaldab avastada isegi üht viiruse rakku.
  4. PCR-testi tulemus on valmis 4-5 tunni jooksul.

Vajaduse korral võib arst proovitesti läbiviimiseks testida uriini. Kõrge täpsus avab võimaluse töötada mis tahes bioloogilise vedelikuga, millest on võimalik DNA viirust eraldada. PCR-i uriinianalüüsi läbiviimiseks peate enne materjali võtmist järgima selliseid piiranguid:

  • vähemalt 1 päev enne soo peatamist;
  • 3 nädalat enne sünnitust tuleb kõik antibakteriaalsed ravimid lõpetada, kuna ravimid pildid paistavad;
  • vajadus analüüsida tühja kõhuga (vedelik on samuti keelatud);
  • vajadus võtta esimese hommikuse osa materjalist.

PCR-testi tulemused

Eespool öeldes on selge, milline on PCR-analüüs ja selle uurimismeetodi ilmsed eelised on nähtavad. Selle diagnostilise protseduuri teine ​​eelis on tulemuste dekodeerimise lihtsus. Arvestades, kui palju PCR-analüüsi tehakse (protsess kestab umbes 5 tundi, kuid labor annab andmed 1-2 päeva jooksul), on see diagnostiline meetod parimal võimalusel paljude infektsioonide tuvastamiseks. Tulemuste kohaselt võib arst teile öelda, et test:

  1. Negatiivne - uuritavas materjalis ei olnud soovitud patogeen.
  2. Positiivne - RNA, patogeenide DNA leiti.

Mõnikord viiakse läbi mikroorganismide kvantitatiivne määramine. See on vajalik haiguste puhul, mis põhjustavad oportunistlikke patogeene. Nende viiruste eripära on see, et need ilmuvad vaid siis, kui need on üle, ja on ruttuuuringute tegemiseks väga problemaatiline. See tegur on oluline terapeutiliste taktikute valikul viirusnakkuste, näiteks hepatiidi, HIV tõhusaks raviks.

12 infektsiooni korral

Selleks et täielikult mõista, mida PCR-diagnoos on infektsioonideks ja kui tõhus see on, peate teadma, et ta suudab eraldada kuni 12 patogeeni. Juhendatud tekst ainult laboris. Uuringus kasutati spetsiifilisi ensüüme, mis suurendavad korduvalt RNA kogust, viiruse DNA fragmendid. 12-infektsiooniga PCR analüüs võib näidata:

  • Mycobacterium tuberculosis;
  • HIV;
  • tsütomegaloviirus;
  • hepatiit C, G, B, A;
  • herpes tüüp 1, 2;
  • Epsteini-Barri viirus (nakkuslik mononukleoos);
  • infektsioonid, mis edastatakse punastele, näiteks klamüüdiaga;
  • listerioos;
  • HPV;
  • kandidaalne infektsioon;
  • Helicobacter pylori;
  • borrelioos, puukentsefaliit.

C-hepatiit

See diagnostiline meetod aitab määrata viiruse olemasolu veres. See annab arstidele võimaluse rääkida oma kohalolekust või puudumisest. Hepatiidi C PCR analüüs on kahte tüüpi: kvalitatiivne ja kvantitatiivne. Esimene võimalus näitab ainult selle olemasolu ja võib sisaldada sõnastust "avastatud" / "ei tuvastatud". Sellel testil on tundlik 10-500 RÜ / ml. See viitab sellele, et organismi patogeeni madala sisaldusega analüüs "ei avastata".

Kvantitatiivne analüüs on täpsem ja näitab infektsiooni kontsentratsiooni veres. Seda indikaatorit nimetatakse "viiruslikeks koormaks", mõõdetuna viiruse RNA koguses konkreetse verehulga kohta. Dekodeerimine erinevates laborites võib erineda. Mõõtühikute hulka kuuluvad lisaks mõõtühikutele ka koopiad IU / ml. ME koopiate ümberarvutamine võib olla järgmine: 1 IU = 4 eksemplari. Kui viiruse olemasolu väärtuse detekteerimisel ületab 800 000 RÜ / ml (või 800 x 103), siis näitab see patogeeni suurt sisaldust.

Tuberkuloosi korral

Kas test peaks olema hommikul. See on oluline selleks, et mitte kogu munarakk, mis moodustati üleöö, jätaks maha. Tuberkuloosi PCR analüüs on sama oluline kui ELISA, Mantoux, tomograaf. Katse aitab tuvastada mükobakterite, uriini seisundi, immunoglobuliini ja ESR-i esinemist, et määrata praeguse seisundi kopsud. PCR-analüüsi tulemuste saamiseks täpsuse saavutamiseks on vajalik järgida järgmisi reegleid:

  1. Külvamine toimub 3 korda, kuid maosisalduse täielik aspiratsioon peaks toimuma ainult haiglas.
  2. Avastab mükobakteri, mis külvab massi olemasolu maos alla 50% diagnoosidest. Isegi optimaalsetes tingimustes on soovitatav ultraheli.
  3. Isegi tulemuse negatiivse olemusega ei saa täielikult välja arvata ESRi, immunoglobuliini või muude näitajate muutusest tingitud tuberkuloosi tekkimise tõenäosust.
  4. Materjalide külvamine PCR-i ajal on vähem patoloogiliste seisundite suhtes vastuvõtlik, kui see on saadud bronhokoskoopilise uuringu käigus, mis välistab lapsele kahtluse TB.

HIV-iga

Paljude inimeste puhul peetakse seda diagnoosi surmaotsuseks. Sel põhjusel, pärast sagedast seksuaalvahekorda, saab inimene tähelepanelikumaid signaale, mida tema keha annab (ja mõnikord ka nendega kaasneb). Kõige usaldusväärsem võimalus selle haiguse kinnitamiseks või eitamiseks on HIV-vastane PCR-test. Katset saab kasutada järgmiste võimalike terviseprobleemide kindlakstegemiseks:

  1. HIV-i esinemise ebaõnnestumine / kinnitamine seronegatiivse kono perioodil.
  2. HIV-1, HIV-2 genotüübi määramine.
  3. Patoloogilise protsessi kirjelduse selgitamine immunoblotti küsitavale tulemusele.
  4. Infektsioon pärast vereülekannet.
  5. HIV-staatuse definitsioonid haiguse emadele sündinud lastel.
  6. See aitab jälgida kehaku viiruse koormust.

HPV-le

Papilloomiviirust saab avastada igal inimesel, pikka aega võib see olla varjatud olekus. Areng provokeerib immuunsüsteemi nõrgenemist, stressi või emotsionaalseid purse. HPV PCR-analüüs aitab määrata viiruse kontsentratsiooni veres. Sel põhjusel on soovitatav teha pigem kvantitatiivne määratlus kui kvalitatiivne määratlus. Need andmed aitavad prognoosida nakkuse pahaloomulist olemust.

HPV esinemise diagnoosimeetod põhineb PCR-i põhiomadustel, et eraldada materjalist viiruse DNA. Testi kõrge tundlikkuse tõttu tuvastatakse isegi väike kogus baktereid. Kvantitatiivsed uuringud annavad arstidele võimaluse määrata kindlaks haiguse ohu määr, prognoosida tulevikku. See diagnoos on vajalik kõigil meestel ja naistel, kes on leidnud tüükad. PCR kvantitatiivne analüüs aitab kindlaks teha, mis põhjustas HPV arengut: immuunsuse ajutine vähenemine või krooniline haigus.

Herpes

Selle mikrobioloogiaga diagnoosi tüübi kasutamine aitab tagada herpese PCR-analüüsi kõrge täpsuse. Viiruse DNA fragmendid kopeeritakse ainult siis, kui materjalis on soovitud geen. Sellisel juhul võib tulemuste katse näidata patogeeni olemasolu või puudumist. Selgitage, et see on võimalik isegi madalal kontsentratsioonil veres.

PCR analüüsi teine ​​eelis seisneb selles, et see võib avastada herpese viiruslikku infektsiooni kohe pärast infektsiooni enne kliiniliste sümptomite ilmnemist. Te saate kindlaks määrata herpese tüübi (1 või 2), spetsiifilise väljaõppe analüüsi ei ole vaja, kuid arstid soovitavad enne vere andmist:

Raseduse ajal

Lapse vedamisel on väga oluline viia see uuring läbi, et registreerida naise staatus. Raseduse ajal on PCR-analüüs kõige tõhusamate meetodite loendis erinevate haiguste olemasolu kindlaksmääramiseks. On vaja läbi viia katse mitte ainult patoloogiate väljaselgitamiseks, vaid ka lapse nakatumise tõenäosuse kindlaksmääramiseks emakasiseseks. Ainult PCR-diagnostika tõttu oli võimalik kindlaks teha progresseerumise määr, paljude infektsioonide areng ema emakasse.

PCR-testimine

Kui olete huvitatud PCR-analüüsi tegemisest, siis peaksite arvestama iga üksikjuhtumiga, arvestades biomaterjali tüüpi. Kaabastamiseks, määrimiseks või vereproovide võtmiseks on oma omadused, näiteks:

  • plasma loobub hommikul;
  • uriin võetakse ainult esimesel hommikul, laboris steriilses mahutis;
  • määrimine või kraapimine on soovituslik ainult pärast vähemalt 3-päevast seksuaalsest kokkupuutest hoidumist;
  • Menstruatsiooni ajal ja 2 päeva pärast seda ei saa te seda määrida.

Kus teha PCR testide läbiviimine

Seda tüüpi uuringud on seotud kaasaegsete ja kõrgtehnoloogiliste diagnostikameetoditega. PCR-iga katsetamine peaks toimuma laborites, kus on täielike tulemuste saamiseks kõik vajalikud kompleksid. Sama oluline on ka kvalifitseeritud ja koolitatud personal. Andke eelistus suurtele, tõsistele, tuntud laboritele. See aitab mitte ainult kiiresti tulemusi saada, vaid ka tagada nende usaldusväärsus.

Teine küsimus, mis sageli huvitab patsiente: kui palju PCR analüüsi maksab? Tänu meetodi uudsusele, vajadusele osta kallis seadmed, on testi hinnaks suhteliselt kõrge hind. PCR-i hind mõjutab infektsiooni tüüp, mida isikut testitakse. Katsete hinnanguline hind ja ajastus on järgmised:

  1. STI-d kontrollitakse ühe päeva jooksul, hind on 400-500 rubla.
  2. Herpes, HPV, Epstein-Barri viirus, tsütomegliiviirus päevas, hind - 300-500 p.
  3. Hepatiidi analüüs tehakse 5 päeva jooksul, kvalitatiivse variandi hind on 500 rubla, kvantitatiivne on 2000 rubla.
  4. Helicobacter pylori tuvastatakse päevas, hind on 400 p.
  5. Antigeenid, HIV antikehad, hind - alates 380 p.
  6. HIV RNA kvalitatiivne analüüs, hind - alates 3 500 p.
  7. HIV RNA kvantitatiivne analüüs, hind - alates 11 000 r.

Video

Artiklis esitatud teave on ainult informatiivsel eesmärgil. Artikli materjalid ei nõua enesehooldust. Ainult kvalifitseeritud arst võib diagnoosida ja nõustada ravi, lähtudes konkreetse patsiendi individuaalsetest omadustest.

PCR diagnostika: mis see põhineb, kuidas nad seda teevad, biomaterjal ja ettevalmistus, millised haigused sobivad?

PCR (polümeraasi ahelreaktsioon) - 20. sajandi lõpu ja 21. sajandi alguse kliinilise laboratoorse diagnostika ühe peamise meetodi saavutamine molekulaarbioloogias, mis toob suurt kasu mitmesugustes arstiteaduse valdkondades.

Paljud inimesed segavad seda ELISA-ga (ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs), mis on üldiselt arusaadav. Nad on mõnevõrra sarnased, kuna nad täidavad ühe ülesande - otsida nakkusohtlike ainete sissetungimist inimkehasse tingitud patoloogiliste seisundite põhjuseks. Siiski on nende vahel erinevusi. ELISA otsib näiteks mikroorganismide jälgi, st antikehi (AT), ja PCR leiab patogeeni - DNA või RNA (nukleiinhapped), mis annavad elu inimkehale võõraste mikroorganismide elus.

PCR-meetodid on kättesaadavad kõigis keha bioloogilistes vedelikes ja kudedes sisalduvate "vaenlase" nukleiinhapete kohta, mistõttu see analüüs ei nõua testina ainult venoosset verd, võite võtta sülje, eemaldada suguelunditest, röga või muudest vahenditest, mis sisaldavad teavet haiguse kohta. Uuringu materjali valik jääb arsti juurde, kes soovitab teatud patoloogiat ja teab, milline keskkond sellistel juhtudel on informatiivsem.

Mis on polümeraasi ahelreaktsiooni olemus?

PCR-uuring on molekulaarbioloogia saavutus ja suurepärane saavutus. See on meetod, mis välisuudme geneetilise materjali (genoomi) DNA või RNA tuvastamise abil suudab tuvastada ainult ühe tüüpi mikroorganismi omaseid omadusi, kuid ei sega seda ühegi teisega. Kuidas PCR-meetod toimib ja kuidas ta suudab taastada elusorganismis nakkusrakkude käitumise pildi?

PCR protsess

Niisiis leiti nukleiinhappefragment, kuid see on üksi ja ei piisa reaktsiooni läbiviimiseks, mistõttu see on kodeeritud (kopeerimine). Edasise protsessi jaoks on siiski vaja palju selliseid mikroploone, mis tagaks selle reprodutseerimise, täites uusi DNA fragmente, mis on identsed leitud fragmendiga (replikatsioon). Paljundamine on nukleiinhappe looduslik ja inalienable omadus, mis replitseerub polümeraasi ensüümi abil isegi väljaspool elusorganismi (proovi katseklaasis), moodustades palju kloone, see tähendab, et toimub ahelreaktsioon. Kõik uued ja uued fragmendid kloonitakse, kuid ainult need, milles teadur on huvitatud. Sellepärast on nii oluline, et võtaks "puhas" analüüs ilma lisanditeta ja teostaks katset väga hoolikalt.

Arvestades ülalkirjeldatud polümeraasi ahelreaktsiooni võimet, võib arvata, miks nii lihtsalt eristab ureaplasma mükoplasmast või mõlemad neist klamüüdioosidest.

Seega, kui inimorganismi miljonite rakkude seas kaob mitte ainult elus viirus ise, vaid ainult osa DNAst, siis PCR, kui see midagi ei takista, hakkab tõenäoliselt ülesandega toime tulema ja teatama "võõrastaja" olemasolust positiivse tulemusega. See on PCRi olemus ja selle peamine eelis.

Tugevused ja nõrkused

PCR-diagnostika laboratooriumil on seadmete, katsesüsteemide ja meditsiinitöötajate kvalifikatsioonide osas kõige kõrgemad nõuded. See on kõrgtehnoloogiline labor, millel on väga tundlike ja väga spetsiifiliste reagentide arsenal, nii et sellel ei ole erilisi puudusi. Kui see ei anna positiivset tulemust kliiniliste ilmingute puudumisel ja seab seega tervishoiuteenuse pakkuja dilemmaga: kas ravi peaks alustama või mitte?

Arst, jälgides patsiendi, hakkab kahtluse alla seletama testitulemuste usaldusväärsust, kuna ta ei näe haiguse märke. Kuid ikkagi, arvestades PCR-süsteemi kõrget tundlikkust, tuleks meeles pidada, et ta avastab patogeeni isegi prekliinilises staadiumis ja selle juhtumi positiivne tulemus on pigem eelis kui ebasoodsas olukorras. Selle põhjal peab raviarsti sobivus otsustama, võttes arvesse teisi plusse ja miinuseid.

Diagnostika eelised polümeraasi ahelreaktsiooni abil on ilmsed:

  • Kõrge spetsiifilisus, ulatudes 100% -ni, mis on tingitud konkreetses organismis olevate nukleiinhapete osakeste olemasolust proovis, kuid inimene võõras;
  • Suure jõudlusega, sest PCR on kõrgtehnoloogiline automatiseeritud tehnika, mis annab võimaluse testida materjali võtmise päeval ja patsiendist vabaneda tarbetutest muredest;
  • Üksiku prooviga töötades PCR on võimeline läbi viima mitmeid uuringuid ja avastama mitut patogeenset ainet, kui tal on selline ülesanne. Näiteks klamüüdia diagnoosimisel, kus PCR viitab põhilistele meetoditele, on koos klamüüdiaga võimalik tuvastada gonorröa põhjustav toime neisseria (gonokokk). Lisaks ei mõjuta negatiivselt tulemuste usaldusväärsus;
  • PCR-i testimine näitab inkubatsiooniperioodil ohtlikke mikroorganisme, kui neil pole olnud aega oluliselt kahjustada organismi, see tähendab, et varajane diagnoos hoiatab patoloogilise protsessi edasise arengu eest, mis võimaldab seda ette valmistada ja täielikult arendada.

Lisaks sellele, et vältida arusaamatusi, mis mõnikord ilmnevad diagnoosimisel, kaitseb PCR ise seda, et selle tulemusi saab fikseerida (foto, arvuti), et neid vajaduse korral kasutada eksperdi jaoks.

PCR-vastustes peetakse negatiivset tulemust, mis viitab välisnukleiinhapete fragmentide puudumisele, positiivne vastus näitab infektsiooni esinemist kehas, digitaalsed väärtused osutavad viiruse seisundile ja selle kontsentratsioonile testimise ajal. Kuid analüüsi täielikku dekodeerimist teostab arst, kes on läbinud eriuuringu PCR-i teemal. Oma tulemuste tõlgendamine ei ole mingit mõtet, kuna on tõenäoline, et see võib valesti aru saada ja hakata muretsema ette.

Mida PCR "kardab", mida ta suudab teha ja kuidas seda ette valmistada?

Nagu ka kõigis teistes uuringutes, on mõnikord katsetulemused vale-positiivsed või vale-negatiivsed, kus PCR ei ole erand. See võib juhtuda järgmistel juhtudel:

  1. Protsessi rikkumine reaktsiooni ühes etapis;
  2. Materjalide kogumise, ladustamise või transportimise eeskirjade eiramine;
  3. Lisandite olemasolu materjalis.

See viitab sellele, et infektsioonide PCR-diagnoosimisel tuleb pöörata hoolikalt, hoolikalt ja hoolikalt, vastasel juhul võivad materjali proovid muuta nende struktuurilist struktuuri või isegi kokkuvarisemist.

PCR-diagnostika etapid. Vale tulemused võivad põhjustada eeskirjade eiramist uuringu igas etapis.

Infektsioonide PCR-diagnostika kuulub muu hulgas laboratoorsete meetodite hulka kuuluvate "kuldstandardite" kategooriasse, nii et seda saab kasutada paljude haiguste patogeenide otsimiseks, millel pole esmapilgul midagi omavahel ühist:

  • Mitmesuguse lokaliseerimise tuberkuloos, kopsupõletik (sealhulgas atüüpiline, klamüüdia põhjustatud);
  • Lapseea nakkused (leetri punetised, parotiit, leetrid);
  • Difteeria;
  • Salmonelloos;
  • Zoonootiline nakkushaigus - listerioos (haigust iseloomustavad mitmed sümptomid, mis kahjustavad lümfisõlmede, kesknärvisüsteemi, siseorganeid);
  • Haigused, mis on põhjustatud Epsteini-Barri viiruse (nakkuslik mononukleoos jne) tungimisest;
  • Inimese papilloomiviiruse nakkuse põhjustatud onkoloogiline patoloogia (HPV ja selle liigid);
  • Borrelioos (Lyme tõbi, puukentsefaliit);
  • Helicobacter pylori nakkus, mis on põhjustatud inimese maos elavast Helicobacter pylori mikroobist. On tõendatud, et Helicobacter põhjustab mao või kaksteistsõrmiksoole vähki;
  • Candidiasis ja peaaegu kõik STD-d.

Eriti tähtis on sugulisel teel levivate nakkuste PCR-diagnostika, sest sellised haigused põevad sageli pikka aega ilma kliiniliste ilminguteta, kuid siis muutuvad nad raseduse ajal aktiivsemaks ja ohustavad seega lapse tervist ja isegi elu. TORCH-infektsioonid käituvad sarnaselt. Mõned neist ("kleepuvad") kehtivad samaaegselt STI-dega, mistõttu tuleb neid üksikasjalikumalt kaaluda. Lugeja saab tutvuda kõige populaarsemate tehnikatega järgmistes artikli lõikudes.

Kuidas korralikult ette valmistada usaldusväärse tulemuse saamiseks?

Kohe märgitakse, et PCR-i ettevalmistamine on üsna lihtne, ilma patsiendi eriliste jõupingutustega. Sa pead lihtsalt täitma kolm lihtsat ülesannet:

  1. Seksuaalvahekorda 24 tundi enne testi;
  2. Veeni vere kogumiseks ja analüüside tegemiseks peate olema tühja kõhuga, muide ei saa seda ka juua;
  3. Enne uriini manustamist peaks ööl olema (hommikul - steriilses purgis, mis osteti apteegist päev enne).

PCR võib töötada mis tahes bioloogilises keskkonnas

PCR-meetod ei erine verejooksu tõttu, mistõttu aktsepteerib see bioloogilist keskkonda, mis sisaldab kahtlustatavat nakkusohtlikku ainet. Tavaliselt jääb arsti jaoks vajalike teadusuuringute valik.

Seega on patogeeni otsimisel lisaks vereanalüüsile (kuigi see sobib ja enamikul juhtudel võetakse paralleelselt teise materjaliga), saate kasutada:

  • Ärevus (urogenitaalsete traktaaaste);
  • Suuõõne, konjunktiva, ninasõletiku, suguelundite limaskestade (naised võtavad emakakaelast ja tupest, mehed - kusejõulised) limaskestad;
  • Sülg;
  • Sperma;
  • Eesnäärme mahla;
  • Platsentuaalne kude ja amnionivedelik (amnionivedelik);
  • Uriini sette (pärast tsentrifuugimist), näiteks mõnede STI-de ja Mycobacterium tuberculosis'e tuvastamiseks;
  • Flegma ja pleura vedelik sama eesmärgil;
  • Eksudaadid;
  • Tserebrospinaalvedelik kesknärvisüsteemi kahtlaste nakkuslike kahjustuste korral;
  • Biopsia materjal (bioptat), mis on võetud maksas, kaksteistsõrmikus, kõhus, jne.

Tahaksin lisada ülaltoodule, et kõikidel juhtudel isegi testimiseks ja väljaheideteks testimiseks piisab, kuna PCR-i testimine ei vaja suuri koguseid, on piisavalt mikroliitereid, mis tavaliselt võetakse Eppendorf-tüüpi mikrotuubidesse ja saadetakse uuringud.

PCR-haigused ja -kasutused

HIV ja polümeraasi ahelreaktsioon

Tavaliselt anonüümse uuringu läbimisel immunoblottimise positiivsete tulemuste korral korratakse HIV-nakkuse diagnoosi uuesti. Kui diagnoosi kinnitab, on patsiendil ette nähtud täiendavad uuringud:

  1. Immunoloogiliste reaktsioonide kasutamine lümfotsüütide CD absoluutväärtuste määramiseks4 (immunokompetentsed rakud - T-abistaja rakud või abistajad), mille nakkus lööb esile, pärast mida nad kaotavad oma põhiomadused ja ei suuda eristada "oma" ja teisi. " Nad võtavad viiruse tsirkuleeriva RNA-d vereplasmas kui organismi normaalsed rakud ja ei reageeri neile;
  2. Viirusmarkerite RNA PCR ja kontsentratsiooni arvutamisega viirusosakeste määramiseks etapil ja raskusest patoloogilise protsessi pidades silmas prognoos andmeid. Loomulikult ei ole selles osas sõna "norm" olemas, sest reaktsioon on alati positiivne ja numbriliste väärtuste dekrüpteerimine kuulub arsti pädevusse.

PCR ja hepatiit

Hepatiidi patogeneesid saab tuvastada PCR-iga, sagedamini kasutatakse seda test hepatiidi C diagnoosimiseks, mida muude meetoditega halvasti tuvastatakse.

C-hepatiidi viirus (RNA-sisaldav) oma kehas käitumises sarnaneb HIV-ga. Paistab maksarakkude genoomi (hepatotsüütidest), ta ootab oma tundi, mis võib tuleneda 2 aastat, vähemalt 20 aastat, nii et arstid nimetasid teda "õrnaks tapjuseks". Hepatiit C põhjustab pahaloomulise protsessi tekkimist maksa parenhüümis, mis avaldub hilisemates etappides. Immuunsüsteem ei tähelda kõiki neid sündmusi, võttes viiruse hepatotsüütide eest. Tõsi, teatud kogustes toodetakse viiruse antikehi, kuid need ei anna korralikku immuunvastust. ELISA-testi diagnoosimine C-hepatiidi suhtes ei ole väga informatiivne, kuna see viitab sellele, et viirus jätab jäljed ja kas ta ise vasakult ei ole teada. HCV-de korral on teada ennastpidavust, samas kui viirusevastased antikehad jäävad kogu eluea jooksul edasi (immunoloogiline mälu). PCR on märkimisväärselt enne antikehade moodustumist ja võib tuvastada viiruse osakest pärast 1-1,5 nädalat, samas kui antikehad võivad ilmneda vahemikus 2 kuud kuni 6 kuud

PCR-diagnostika C-hepatiidi viiruse kahtluse korral inimkehas on kõige optimaalne uurimismeetod, sest ainult ta suudab tuvastada "leebe vaenlase" olemasolu patsiendi veres või biopsiaproovis.

Siiski on mõnikord juhtumeid, kus AT on positiivne ja PCR-i tulemus on negatiivne. See juhtub mõnikord väga väikese viirusetüvega või kui see on "peatudes" maksas ilma vereringesse sisenemata. Selleks, et ikkagi tõde leida, võetakse patsiendist teise või isegi rohkem kui üks analüüs.

Inimese papilloomiviiruse nakkus

HPV (inimese papilloomiviirus), kui enesehooldus ei toimu, võib ka iseenesest ilmutamata püsida peremeesorganismis pikka aega, millest isegi ei kahtlustata, kuna PCR-i ei tehtud ja sümptomid puudusid. Kuid inimese papilloomiviiruse nakkuse olemasolu, ehkki latentne, ei ole kaugeltki ükskõikne inimeste tervisele, kus teatud tüüpi viirused, mis põhjustavad vähktõbe, on eriti ohtlikud (tüübid 16, 18).

Veelgi sagedamini kannab naissoost pool elanikkonnast HPV-d, kuna viirus armastab naisterahvaid ja eriti emakakaela, kus teatud viiruste tüübid soodustavad düsplastilisi protsesse ja seejärel emakakaela vähki, kui te düsplaasiat ei ravita ega viiruse vabastamist. Niisiis tuvastab polümeraasi ahelreaktsioon viiruse DNA ja seejärel näitab naise kehas asuvat tüüpi "halb" või "hea" (onkogeenne või mitte-onkogeenne).

Muud STId ja TORCH infektsioonid

Ilmselt võib polümeraasi ahelreaktsioon leida nukleiinhapetest koosneva välisstruktuuri, mistõttu see katse sobib kõigi STD ja TORCH nakkuste tuvastamiseks, kuid seda ei kasutata alati. Miks, ütleme, et läbi viia selline kallis uurimus Trichomoni või gonokoki avastamiseks, kui on odavam ja odavam?

TORCH-nakkused ja STLId on omavahel nii omavahel seotud, et mõnikord on raske kindlaks teha, millisele rühmale peaks olema määratud konkreetne patogeen. Neid on üldiselt raske mõista, sest nad on üsna erinevad mikroorganismide rühmad, mis võivad alati olla sugulisel teel levivad või ainult teatud tingimustel (immuunpuudulikkus) ja võivad olla huvipakkuvad ainult raseduse ajal, kuna sellel võib olla negatiivne mõju selle loomulikule liikumisele ja lootele.

PCR - peamine meetod varjatud nakkuste tuvastamiseks

Kliiniliste manifestatsioonide väljatöötamine põhineb mitmesugustel patogeenidel, mida saab leida ainult PCR-iga, mis on selle peamine ülesanne mõnikord koos ELISA-ga ja mõnikord ainsaks kinnitavaks testiks, eriti kui haiguse sümptomid puuduvad. Selline raske olukord võib tekitada mikroobivastast infektsiooni, mis lisaks nähtavatele põhjustajatele sisaldab ka oportunistlikke patogeene.

Suguelundite põletikuliste haiguste all kannatavatel meestel avastatakse sageli näiteks uretriit, klamüüdia, ureaplasma ja mükoplasma. Need samad tüübid on ohtlikud ja naisorganismid. Need, kes tunnevad klamüüdia võitlust ja on sellega kokku puutunud, mäletavad kindlasti seda, kui raske on see leida ja tunnustada, seetõttu on klamüüdiaga PCR-i poolt läbi viidud analüüs eriti usaldusväärne, kuna väga väikese suurusega rakus peidetud parasiit käitub ettevaatlikult ja alati kahjustab salaja.

Ureaplasma peetakse tihtipeale mükoplasma omavaheliseks. Ja see ei ole juhus. Neid liike, nagu klamüüdia, ei klassifitseerita viirusteks ega bakteriteks, nad elavad rakkudes ja kuuluvad STLI-dele, kuigi nende esinemine tervislikus organismis on samuti kaugel ebatavaline. Seega, selleks, et eristada tervislikku kandjat haigestunud isikult, on vaja spetsiaalseid meetodeid, kus PCR-i peetakse kõige usaldusväärsemaks, kuna nende mikroorganismide struktuuri ja käitumise iseloomust tulenevalt on muud uuringud ebaefektiivsed.

Mis puudutab herpesviirust (1. tüüpi tüüp 2) ja tsütomegaloviirust, mis kuulub samuti herpesviiruste hulka (tüüp 5), siis on olukord ka mitmetähenduslik. Maailma elanikkonna nakatumine läheneb 100% -le, seetõttu on antud juhul väga oluline viiruse ja selle annuse tuvastamine, mis mängib raseduse ajal eriti olulist rolli, sest täiskasvanu, kes on tema kehasse juurinud, ei põhjusta tihti sageli probleeme ega haiguse tunnuseid.

Seetõttu ei tohiks eirata arsti ettekirjutatud analüüsi, sest mõnel juhul on polümeraasi ahelreaktsioon asendamatu ja vajalik laborianalüüsi meetod, mis võib kaitsta mitte ainult naise, vaid ka väikest ja veel sündimata inimest tõsiste komplikatsioonide tõttu.

Lõpetuseks tahaksin märkida, et selline suurepärane meetod, nagu PCR, on teeninud inimkonda rohkem kui 30 aastat. Samal ajal ei piirdu katse ülesanded nakkushaiguste patogeenide otsimisega. Polümeraasi ahelreaktsioon, mis on sündinud molekulaarbioloogia põhjal, on lahutamatult seotud geneetikaga, seda kasutatakse kohtuekspertiisi käigus edukalt üksikisikute väljaselgitamiseks, iseseisvuse määramiseks kohtuekspertiisi valdkonnas veterinaarmeditsiinis, kui loomakliinikul on võimalus osta kallis seadmeid ja ka muudes valdkondades ( tööstus, põllumajandus jne).